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参考报价: | 面议 | 型号: | 蛋白质组学服务 |
品牌: | 敏心生物 | 产地: | 上海 |
关注度: | 15 | 信息完整度: | |
样本: | 典型用户: | 暂无 |
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蛋白质组分析(proteomics) 是对生物蛋白组(proteome) 的分析与检测,蛋白组分析首先要将混合蛋白质分离, 分离的主要方法是蛋白双向电泳。已被分离的蛋白质由质谱分析对其进行鉴定。
质谱检测主要有三种方式:
1)基质辅助激光解析电离质谱技术(MALDI - TOF - MS )
2) 电喷雾电离串联飞行时间质谱技术(ESI- TOF- MS)
3) 表面增强激光解析离子化-飞行时间质谱技术 (SELDI- TOF- MS)
前两种技术分别针对高分子量蛋白质和低分子量蛋白质的检测,第三种技术集蛋白质芯片和质谱于一身,具有灵敏度高,样本要求低等特点,可同时检测高分子量和低分子量蛋白质,目前被广泛应用于恶性肿瘤标志物筛选的研究。
敏芯科技在蛋白组分析方面积累了丰富的经验,可以为客户提供从实验设计、实验操作到数据分析全程的解决方案。
双向电泳
双向电泳是目前为止最有效、使用最多的蛋白分离方法。
第一相电泳为蛋白等电聚焦(IEF), 它使蛋白质依各自等电点的不同进行分离;第二相电泳为十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE), 它使蛋白质依各自相对分子量的不同进行分离。
*DIGE系统
传统的差异蛋白质组学是在双向电泳后用考麻斯亮蓝、银离子或荧光染料等将蛋白斑点染色,然后比较差异;
Differential In Gel Electrophoresis(DIGE)是用Cy2、Cy3、Cy5等灵敏的荧光染料预先标记好蛋白,然后混合起来在一张凝胶上做双向电泳,最后用不同波长扫描得到相应的电泳图谱。具有灵敏性高、线性范围宽、重复性好、与质谱兼容好等优势。
质谱检测
*敏芯科技SELDI平台
SELDI蛋白质芯片可直接检测不经处理的尿液、血清、脑脊液、关节腔滑液、支气管洗出液、细胞裂解液和各种分泌物等,从而检测未知蛋白,因此较广泛的应用于肿瘤特异性标志物的筛选。
*敏芯科技MELDI平台
以多肽质量/电荷比为依据同数据库资料进行比较进而对蛋白进行鉴定, 此法通常被称为多肽质量指纹分析
检测结果通过分析软件处理可获得样品中各种蛋白质的信息如分子量、含量等,并进行差异性分析,从而寻找有意义的标志物或质谱图谱。分析方案请参见www.sensichip.com.cn
数据分析
*分析步骤:
一、对双向电泳得到的可辨认的蛋白点进行识别和比对;
二、计算不同组织中被标记的相应蛋白点的光密度;
三、统计所有存在差异的蛋白点;
四、通过MASCOT数据库检索来确定蛋白点所对应的基因;
*DIGE 2-D分析方案
一、层次聚类分析
二、Gene ontology分析
三、 network分析
四、Pathway enrichment分析
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