400-6699-117转1000
虚拟号将在 XXX 秒后失效,请在有效期内拨打
若未完成电话咨询，您可提交留言咨询，厂商主动联系您
咨询列表
安捷伦科技（中国）有限公司
虚拟号将在 XXX 秒后失效,请在有效期内拨打
真菌菌丝体蛋白质高效提取方案｜加强型冷冻组织研磨仪HGC24
冯伟-上海一韦仪器科技有限公司
实验目的
采用一韦仪器加强型冷冻组织研磨仪HGC24高频振荡与适配器定制系统，实现对真菌菌丝体的高效破碎与蛋白释放，旨在提升蛋白提取效率与酶活保留率，适用于真菌次级代谢产物研究、酶学分析及蛋白质组学。
实验仪器和材料
仪器：一韦仪器加强型冷冻组织研磨仪 HGC24
材料：5ml研磨罐、4mm不锈钢珠、真菌菌丝体、真菌蛋白提取缓冲液（50mM Tris-HCl pH7.5, 150mM NaCl, 1% Triton X-100, 含蛋白酶抑制剂）、液氮
实验步骤
收集约0.3g新鲜或冷冻的真菌菌丝体
用预冷PBS漂洗菌丝体，去除培养基成分
将菌丝体转移至5ml研磨罐中，加入2颗4mm不锈钢研磨珠
加入2ml预冷的真菌蛋白提取缓冲液
将研磨罐浸入液氮中速冻2分钟
装入HGC24适配器，设置程序：温度-15℃，频率60Hz，时间150秒，湿磨模式
启动研磨程序，确保菌丝体完全破碎
研磨后冰上放置10分钟，期间偶尔涡旋
4℃条件下，14000rpm离心20分钟
小心吸取上清，避免吸入沉淀和脂层
用Bradford法测定蛋白浓度，分装后-80℃保存或立即分析
实验数据
蛋白得率：较传统研磨法提升45%，达8-15mg/g菌丝体
酶活保留率：纤维素酶、木聚糖酶等关键酶活性＞90%
处理通量：使用15ml×8适配器，单次处理8个样本，总时间约30分钟
蛋白完整性：SDS-PAGE显示蛋白条带清晰，高分子量蛋白保留完好
次级代谢相关酶：聚酮合酶、非核糖体肽合成酶等检测信号强
质谱适用性：胶内酶解后LC-MS/MS鉴定蛋白数＞1500
结论
一韦仪器加强型冷冻组织研磨仪HGC24的高频振荡结合定制适配器系统，能有效破碎坚韧的真菌菌丝体细胞壁，充分释放胞内蛋白特别是膜结合蛋白和酶复合物。低温操作保护了蛋白活性和修饰状态，为真菌次级代谢产物生物合成研究、工业酶开发及真菌蛋白质组学提供了高效可靠的前处理方案。
