全基因激活库（人）

 全基因激活库的用途
 

       CRISPR/Cas9作为当今基因编辑领域最热门的明星工具，自2014年以来，多篇CNS(Cell、Nature、Science)连续报道了基于CRISPR/Cas9的高通量筛选技术。本公司的基于CRISPR/Cas9的全基因激活库（人）可以用于药物靶标发现，药物敏感基因、耐药性基因、肿瘤细胞增殖关键基因、肿瘤转移基因、放疗耐受基因、细胞对致死致病原感染敏感关键基因的高通量功能性筛选等。

 

全基因激活库（人）介绍

       全基因激活库（人，Human CRISPR Activation Library(SAM - 2 plasmid system)）购自Addgene（1000000078），由张锋的团队构建（Genome-scale transcriptional activation by an engineered CRISPR-Cas9 complex. Nature. 2015）。
       全基因激活库（人）为慢病毒载体文库，具有高感染与激活效率。全基因激活库（人）具有70290个sgRNA结构，靶向人类基因组中23430个基因。

 

 Human CRISPR Activation Library(SAM - 2 plasmid system)SpecieshumanNumber of genes targeted23,430Targeting constructs per gene3Total sgRNA constructs70,290Viral plasmid vectorlentiSAMv2

全基因激活库（人）的工作原理

 

       全基因激活库（人）表达的sgRNA的靶位点均在基因转录起始位点上游200bp内，其载体骨架是lentiSAMv2（Addgene，75112）。lentiSAMv2表达具有两个SM2茎环结构的sgRNA和dCas9-VP64。dCas9能够与sgRNA结合，但是没有剪切DNA的活性，VP64是强转录激活域。全基因激活库（人）可以单独使用，而与lenti MS2-P65-HSF1_Hygro（Addgene，61426）联用具有更强的激活表达效果。lenti MS2-P65-HSF1_Hygro表达MS2-P65-HSF1蛋白，MS2结构域能够与SM2茎环结构结合，P65和HSF1是强转录激活域。
全基因激活库（人）和lenti MS2-P65-HSF1_Hygro共转染细胞时，由具有SM2茎环结构的sgRNA、dCas9-VP64和MS2-P65-HSF1组成的复合体结合到基因组DNA中的靶位点上，激活下游基因大量转录。

 

全基因激活库（人）的使用方法
 

1、lenti MS2-P65-HSF1_Hygro包装慢病毒。
2、慢病毒粒感染目标细胞，Hyg筛选得到稳定细胞株。
3、全基因激活库（人）包装慢病毒，感染表达MS2-P65-HSF1的稳定细胞株。
4、用BSD筛选出阳性细胞。
5、药物筛选或者辐射处理等，对照组不处理或者虚假处理。
6、提取基因组DNA，PCR扩增sgRNA的编码序列。
7、sgRNA的编码序列高通量测序。
8、比较对照组和实验组的高通量测序结果，筛选感兴趣的基因。
9、单独验证筛选出来的基因。

 

使用CRISPR/Cas9全基因激活库的文献

 

1、Genome-scale transcriptional activation by an engineered CRISPR-Cas9 complex. Nature, 2015
2、 Compact and highly active next-generation libraries for CRISPR-mediated gene repression and activation . Elife, 2016
2、Genome-scale CRISPR-Cas9 Knockout and Transcriptional Activation Screening. Nature Protocols, 2017
4、Genome-scale activation screen identifies a lncRNA locus regulating a gene neighbourhood. Nature, 2017

 

全基因激活库（人）出货说明

 

1、全基因激活库（人）20μg，浓度500ng/μL以上，超螺旋率95%以上。
2、全基因激活库（人）说明书一份。
3、随时出货。

  

全基因激活库（人）信息由广州辉园苑医药科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于全基因激活库（人）报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途