原代狗肝细胞

狗原代肝细胞使用说明书

Cat No：TOPCP0007

产品简介
TopBiotech提供的狗原代肝细胞取自新鲜肝组织，按照标准操作流程分离培养。自主研发的狗原代肝细胞完全培养基（货号：TOPMP0007）能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，同时保证不同批次间细胞质量的稳定。此外，TopBiotech还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测来保证细胞纯度；同时也需要经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其它类型的细菌和病毒。

细胞简介: 肝细胞是肝脏的实质细胞，为组成肝脏的主要细胞，占肝脏体积及数量的80%，属高度分化的细胞。肝细胞内代谢活跃，可合成人体必需的凝血因子、脂肪酸、胆固醇、磷脂等，并贮存糖元、蛋白质、脂类和维生素，以供机体需要。肝细胞为多角形，不同的生理条件下大小有差异，如饥饿时肝细胞体积变大。分离的单个肝细胞的直径最大可达20-30μm，每个肝细胞的表面可分为肝窦(血窦)面、毛细胞胆管面和相邻的肝细胞面。生活状态的肝细胞有一定的弹性，不同的动物和不同的生理状态体积变化较大。
组织来源：狗肝组织
产品规格：1×106/Vial（冻存细胞/干冰运输）或1×106/ T-25 flasks（活细胞运输）
细胞纯度：>90％
细胞活力：98％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养信息：贴壁生长，成纤维细胞样
细胞培养基：DMEM、 FBS、Penicillin、Streptomycin、细胞因子等
细胞冻存：液氮冻存（完全培养基+10%DMSO+20%FBS）
我们推荐使用TopBiotech的狗原代肝细胞完全培养基（货号：TOPMP0007）作为体外培养使用的培养基。 

运输保存
干冰运输：收到细胞时，若干冰已经完全融化，请立即将细胞复苏培养；若尚留有干冰，请立即将细胞放入液氮中保存待用，请按指定条件贮存细胞，切不可将细胞置于高温环境。
常温运输：取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态；待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。 
一、细胞复苏
1. 将水浴锅预热至37℃。
2. 用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。
3. 在超净工作台中按次序摆放消过毒的离心管、吸管、培养瓶等。
4. 迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化，时间控制在1分钟左右。
5. 融解好的细胞迅速放进离心机中，2000r/min 或者600g离心2min。
6. 用4-5ml完全培养基重悬细胞，吹打制成单细胞悬液，细胞浓度以5×105/ml为宜。
7. 将复苏好的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃和5％CO2的培养箱内，8-24小时后换液继续培养，换液时间由细胞生长情况而定。
二、传代培养
1. 细胞吸除或倒掉原瓶中的旧培养基（以25mL培养瓶为例）。
2. 每瓶加入2mL 的PBS，漂洗一次后倒掉。
3. 每瓶加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.02%EDTA或混合液），轻轻摇动培养瓶，经消化液铺满所有细胞表面，待细胞层略有松动，肉眼可观察到“薄膜”现象时，倒掉消化液，再继续作用2~3分钟，轻轻摇动，细胞层可随残留的消化液呈片状从瓶壁上脱落下来，在显微镜下可发现细胞回缩变圆，细胞间隙增大，此时应立即终止消化。
4. 加入完全培养基5mL，用吸管反复吹打瓶壁上的细胞，吹打时要按顺序进行，以确保所有瓶壁均吹打到，吹打时动作要轻柔，不要用力过大，尽可能不要出现泡沫，以避免细胞的机械损伤。
5. 细胞用计数板计数，计算细胞的浓度，并用培养基调整适当的细胞浓度后再分瓶培养。
三、细胞冻存
1. 配制含10%DMSO、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；
4. 消化完成后加入完全培养基终止消化，收集细胞悬液1000rpm离心5min；
5. 去除上清，加入适量冻存培养液后轻轻吹打使细胞均匀，计数并调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml，在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
7. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，最后取出冻存管，移入液氮容器内。
四、 注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后每天拍照记录细胞生长状态，便于和技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
备注：该细胞只可用于科研，由于实验所用试剂、 操作环境及操作手法的不同， 以上方法仅供各实验室参考。

 

原代狗肝细胞信息由深圳市拓普生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于原代狗肝细胞报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途