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工商注册信息已核实!参考报价: | 面议 | 型号: | PCR 96T/盒 |
品牌: | 美正 | 产地: | 中国 |
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样本: | 典型用户: | 暂无 |
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采用实时荧光PCR技术,针对沙门氏菌特异性基因设计引物和探针。PCR扩增过程中,与模板结合的探针被Taq酶分解产生荧光信号,荧光定量PCR仪根据检测到的荧光信号绘制出实时扩增曲线,从而实现沙门氏菌在核酸水平上的定性检测。
1、样品处理
1)按照GB 4789.4-2016(或SN/T 1870-2016),取样品25g(mL),加入到含有225mL预热BPW的无菌容器中均质,调节pH至6.8±0.2。
2)36±1℃培养18-24h。
注:也可参考其他地方标准进行样品的前处理。
2、核酸提取
1)取40μL增菌液于裂解液管中,98℃或沸水浴10min。
2)冷却至室温,吸取上清备用或者置于-20℃保存。
3、反应体系配置
从试剂盒中取出SAL预混液,充分融化,短暂离心,然后将阴性对照、样品的DNA提取液、阳性对照各取5μL分别加入PCR管中,盖好管盖,短暂离心,立即进行PCR扩增反应。
4、PCR扩增
PCR管置于PCR仪上,推荐反应程序设定如下:反应体系为25μL,在第二步每个循环60℃时检测荧光信号,检测通道选择FAM。
第一步 | 第二步 | ||
1次 | 45个循环 | ||
95℃ | 95℃ | 60℃√ | 72℃ |
5min | 15s | 30s√ | 30s |
注:使用ABI系列PCR仪器,如果不添加ROX,此时“passive reference”和 “quencher”均选择“none”。
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