临床科普｜为什么要测脂溶性维生素？

维生素（Vitamin）又被称为维他命，是维持正常生理功能所必需的一类微量物质。

维生素从化学性质上可大致分为水溶性和脂溶性维生素。脂溶性维生素主要以维生素 A（视黄醇），维生素 D（25-羟基 D2,25-羟基 D3），维生素 E（α-生育酚），维生素 K（叶绿醌 K1）为主。人体对维生素的需求很小，但是不可缺乏，一旦缺乏就会引发相应的维生素缺乏症。比如缺乏维生素 A 容易引起夜盲症、干眼症、皮肤病、免疫功能低下和感染增多[1]，缺乏维生素 D 除了可引起与骨骼肌肉相关的疾病还与多种疾病的存在相关[2]；维生素 E 是重要的生物抗氧化剂，可以增强身体免疫能力，保护肝脏，预防皮肤出现角质层增厚等功效，在新生儿中容易出现维生素E缺乏的现象，容易引起新生儿贫血、全身水肿和神经系统症状[3]。维生素 K1 是肝脏合成凝血酶原不可缺少的物质，其作用是促使凝血酶原前体转变为凝血酶原。缺乏时会引起低凝血酶原血症，出现凝血障碍[4]。

[1]N.JI.克里察金,周景春.维生素A缺乏病.《人民军医》.1953

[2]毛萌，刘震.维生素D3生理功能及临床应用[J].华西医学,1991,8(3)；299-301.

[3]卢宪梅.新生儿维生素E缺乏病.《山东医药》,1994

[4]王镜岩 朱圣康 徐长法.生物化学(第三版 上册),北京:高等教育出版社,2002:6

安捷伦 LC-MS/MS 解决方案 

安捷伦建立了人血清/血浆中 5 种脂溶性维生素的定量检测方法，可以同时测定血清中的视黄醇（VA）、25-羟基维生素 D2（25-OHD2）、25-羟基维生素 D3（ 25-OHD3）、α-生育酚（VE）、叶绿醌（VK1）。

检测方法

液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）

仪器

Infinity LC Clinical Edition/K6460（包含了液相色谱仪、三重四极杆质谱仪、MussHunter Workstation 采集软件），注册证号：国械注进20202220004

质谱条件

使用 AJS ESI 源，监测模式为多反应监测（MRM）

 方法学考察及验证 

人血清样品标准 LC-MS/MS 色谱图

图 1 人血清样品 MRM 色谱图

峰归属（基于洗脱时间）25-OHD3、25-OHD2、VA、VE、VK1

灵敏度

标准曲线 S1 浓度下，样品灵敏度情况如下图所示：

图 2 人血清基质样品种 S1 浓度级别 LC-MS/MS 色谱图

5 种脂溶性维生素的定量下限分别为：VA 17.8ng/mL，25-OHD2 0.35ng/mL，25-OHD3 1.2ng/mL，VE 225.7ng/mL，VK1 0.16ng/mL。

线性范围及相关系数

5 种脂溶性维生素标准曲线

线性范围：VA  17.8 – 2287.8 ng/mL, 线性相关系数 r 大于 0.99；25-OHD2 0.35-45.0 ng/mL，线性相关系数 r 大于0.99；25-OHD3 1.2-77.1 ng/mL，线性相关系数 r 大于0.99；VE  225.7- 28891.5 ng/mL，线性相关系数 r 大于0.99；VK1 0.16-20.49 ng/mL，线性相关系数 r 大于 0.99。

准确度：各浓度点均在 80% - 120% 以内。

回收率

本方法人血清样品高低两个浓度级别的添加回收率满足 85.0% - 115.0% 要求，实测结果：回收率情况如下表。

表 3 加标样品回收率情况

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