NovoCyte应用-13色抗体组合分析人白细胞免疫表型

造血干细胞移植（Henmotapoietic Stem Cell Transplantation, HSCT）是治疗血液系统疾病、自身免疫性疾病、某些实体瘤和基因缺陷疾病的重要手段之一。在造血干细胞移植的过程中，采集足够数量的造血干细 胞是移植成功的关键。CD34 是 80 年代中期发现的一种细胞表面分子，此分子在骨髓和外周血未成熟的造血细胞及所有具有造血潜能的集落形成细胞上表达，包括多能和定向造血祖细胞。大量的临床研究证实用富含 CD34⁺ 细胞组分移植可安全、持久地获得多系造血重建。

流式细胞术因具有快速、简便、可定量等特点，已广泛应用于移植物中造血干/祖细胞数量的检测及确定采集时机等。流式细胞术计数 CD34⁺ 细胞经历了从单参数 到多参数分析、从双平台到单平台计数、从各实验室自由抗体组合到商业化试剂盒应用等一系列的演变。1996年血液病治疗与移植国际联合会（International  Society of Hematotherapy and Graft engineering, ISHAGE）采纳了 CD45/CD34 双色标记多参数累积设门的方法用于 CD34⁺细胞识别及计数，被命名为 ISHAGE 方案。ISHAGE 方案使用 CD45、CD34、FSC 和 SSC 四个参数累积设门。CD45 是白细胞抗原，只表达于白细胞而不表达于血小板和红细胞表面，在不成熟的干 / 祖 细胞表面表达较弱。因此利用 CD45 设门可以去掉血小 板、红细胞和碎片，设定干/祖细胞。在 SSC/CD45 二 维图中设 CD45⁺ 为 R1，基于 R1 在 SSC/CD34 二维图 中 选 CD34⁺ 为 R2，基于 R2 在 SSC/CD45 二维图中设 CD45 弱阳性为 R3，R3 中 FSC 大的细胞为造血干/祖细胞。CD34 阳性细胞计数时，应获取最少 75000 个 CD45⁺ 细胞及 100 个 CD34⁺ 细胞，比例计算的分母为 CD45⁺ 白细胞 。

ACEA NovoCyte 流式细胞仪采用高精度注射器精准控制样本体积量，配合极低流路细胞损失，无需借助参考微球即可实现绝对计数。本文采用CD34计数试剂盒免洗流程，基于国际公认的 ISHAGE 圈门方法，在 NovoCyte 上单平台、免微球计数 CD34⁺ 细胞，展示一个简单、准确、低成本的 CD34⁺绝对计数方法。

扫描下方二维码，关注“安捷伦视界”微信公众号，获取更多解决方案资讯。