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01 什么是酶联免疫吸附测定？

酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA），是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。自上世纪70年代初问世以来，发展迅速。

ELISA是基于抗原-抗体的特异性结合反应建立起来的一种快速检测技术， 它将酶促反应的高效率和免疫反应的高度专一性有机地结合起来，可对各种微量有机物含量进行测定。

抗原、抗体小知识

抗原决定簇示意图

抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后，可刺激机体引起细胞免疫和产生抗体。抗原的反应性取决于抗原决定簇。一个抗原分子可带有不同的决定簇。

抗原抗体结合反应示意图

抗体是指能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。

抗原抗体的关系就如同特定的钥匙和锁，一一对应，只有找到正确的钥匙--抗原才能打开对应的锁---抗体。

02 酶联免疫吸附试验原理

1、使抗原或抗体结合在固相载体表面，并保持活性。

2、使抗体或抗原与某种酶连接成酶标记抗体或抗原。

3、在测定时，把受检抗体（或抗原）和酶标抗原（或抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原（或抗体）一起反应。

4、采用洗涤的方法去除未结合的酶标抗原（或抗体），最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。

5、加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物。

6、产物的量与标本中受检物质的量直接相关，可以根据颜色反应的深浅来进行定性或者定量分析。

03 酶联免疫吸附试验分类

间接法（Indirect ELISA)：

将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗

检测待测液体中未知抗体

双抗体夹心法（Sandwich ELISA）：

将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗

检测待测液体中的可溶性抗原

竞争法（Competitive ELISA）：

将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体

检测待测液体中的可溶性抗原或抗体

04 酶联免疫吸附试验的优势

1、检测速度快：可以制备成相应检测试剂盒，多样品同时检测，大大缩短检测时间。

2、特异性强：其利用抗原与抗体的特异性结合测定，具有选择性高的特点。

3、灵敏度高：结果的准确性和方法的灵敏度与仪器分析方法一致。

4、操作简单：不需要大型仪器设备，试剂盒可以直接处理，不需要二次加工。

5、便于推广：对试验人员的技术要求不高，便于技术推广。

05 酶联免疫吸附试验的应用

由于酶联免疫法具有快速、操作方便、灵敏度高的特点，适用于现场检测，其应用范围也在不断扩大，目前已被广泛应用于食品检测和医学检测中。在食品检测中主要用于检测植物性食品的农药残留、动物性食品的兽药残留、真菌毒素、食源性微生物及食品中特殊蛋白质、重金属等。