高纯度RNase A纯化工艺方案分享

核糖核酸酶A

核糖核酸酶A（Ribonuclease A，缩写RNase A），是一种含4个二硫键的单链多肽，分子量约为13.7kDa（氨基酸序列）。RNase A是一种核糖核酸内切酶（endoribonuclease）。

核糖核酸酶层析纯化思路

提取及粗纯方案

我们基本采用牛胰腺硫酸铵盐析粗提物（由McDonald根据Kunitz氏纯化方法修改，“Methods in Enzymology”，Vol.ⅡP429，1955.）。

精纯方案

我们使用CM Tanrose 6FF为层析介质。这是月旭科技研发的一款高流速琼脂糖基架弱阳离子交换介质填料。以6%高度交联的琼脂糖为基架的介质，平均粒径及粒径范围分别为90μm，45-165μm，具有流速快、分辨率高的优点，是大规模生物分子分离纯化的首选介质。洗脱后的核糖核酸酶A纯度可提升至71~86%，并通过进一步去杂后，最终纯度大于95%，最终收率约56%。

结论：

通过对牛胰腺盐析粗提物处理，上样CM Tanrose 6FF进行RNase A的分离纯化，其纯度得到了很大的提升，去除了较多的杂蛋白，经后续一定的处理后，跑SDS-PAGE胶，凝胶成像仪分析显示单一条带，符合纯化要求。