Amnis CellStream 超高灵敏度多色流式细胞仪

Luminex的Amnis® CellStream® 流式细胞仪系统是一种高度可定制的紧凑型流式细胞仪，它首次采用TDI-CCD进行检测。细胞外囊泡作为细胞间通讯的关键介质的重要性直到最近才被发现。观看本演示，了解有关Cellstream系统内独特的Amnis®延时集成技术如何实现细胞外囊泡免疫表型分析的更多信息。（33分钟）

新型CellStream® 台式流式细胞仪为细胞和颗粒分析提供了无与伦比的灵敏度和灵活性。它设计紧凑，采用了最先进的Amnis® 成像型流式细胞仪的独有光学zl检测技术，最高可配置7根激光器。凭借超高灵敏度和配置灵活的光学系统，该设备可根据研究人员的科研需求和预算来定制或者升级，以实现多参数检测。

Cellstream超高灵敏度多色流式细胞仪

特征

• 无与伦比的荧光灵敏度—CellStream流式细胞仪系统具备超高荧光灵敏度 FITC<10 MESF，PE<5 MESF。

• 可选择配备1到7根激光器—CellStream系统可以配置1到7个激光器。激光升级可在您的实验室快速完成，无需返厂升级，减少停机时间。

• 独特的细胞图像实时预览功能—CellStream数据采集软件具有独特的图相采集功能，可对细胞群体进行验证，圈选正确的细胞群体，去除粘连体细胞。

• 标准配置96孔板自动上样系统—所有CellStream系统同时配备了单管和96孔板高通量自动上样系统。样品混合和清洗步骤自动完成，以实现无人值守的高通量采集。

• zl的光学检测系统—CellStream流式细胞仪系统应用zl的时间延迟积分整合（TDI）技术和感光耦合相机进行信号采集，可快速捕获低解析度细胞图像并将其转换为高通量荧光强度数据

7激光CellStream流式细胞仪的荧光激发和信号采集

标配单管和96孔板高通量自动上样检测系统

CellStream流式细胞仪系统可实现自动上样的高通量检测。内置标配的自动上样托盘，可容纳96孔板。为了确保细胞在取样过程中保持悬浮状态，每个孔在取样前对样品进行混匀，因此无需手动混匀。为了防止样品间交叉污染，上样针会在样品取样之间自动进行清洗，效果比振荡式或抽吸式更好。

CellStream仪器参数

* 等效可溶性荧光染料分子

** 使用鸡红细胞核（CEN）的变异系数

Cellstream光学技术

拥有zl的光学元件和可灵活配置的7激光容量的流式细胞仪系统

CellStream台式流式细胞仪采用获得zl的Amnis®光学技术，能够配置1至7个激光器。这为研究人员提供了无与伦比的灵敏度，可以根据研究需求和预算来灵活定制和扩展系统。

与多种常见的荧光染料和荧光试剂兼容

科学的激光和检测器设置，确保CellStream仪器与用户常用、有效的荧光素兼容，并可使用多种亮度高、光稳定性强的新型染料。

CellStream系统光路

zl的TDI和摄像检测技术提供超越传统流式细胞仪的灵敏度和可扩展性：

1. 多达7个激光器聚焦在不同位置。

2. 流体动力学聚焦的细胞通过激光照射区域。与细胞结合的荧光染料被激发，激发出的荧光信号被导入采集系统，收集到的荧光信号进入检测器中。

3. 滤片堆栈将成像机中的四个独立的、垂直排列的成像区域分解为22个单独的数据收集通道。

4. 所有22个通道均有效地集成在CCD（电荷耦合器件）阵列上。

CellStream System的信号收集器使用与zlAmnis®相同的 TDI CCD技术，含有多个独立的收集区域

CellStream流式细胞仪光学系统工作原理

CellStream系统采用最先进的Amnis®成像型流式细胞仪一样的TDI-CCD技术。这个技术已广泛应用于医疗放射影像和军事中，用于捕获快速移动物体的图像。

CellStream流式细胞仪内的定制化相机使用TDI技术进行操作，即使检测器与成像物体之间存在快速相对移动，专用检测器读数模式也可保持灵敏度和图像质量。TDI CCD检测技术从液流中细胞上获取信号的能力是传统分幅成像的1,000倍。速度检测和自动对焦系统在图像采集过程中保证相机的同步和聚焦。

与任何CCD一样，图像光子在像素阵列中转换为光电荷。在TDI CCD运行过程中，光电荷在平行于液流方向、连续地从上一排像素向下一排移动，最终将多个像素的信号整合到一起。这个过程是通过使光电荷移动速率与液流速度同步实现的，效果类似于物理平移相机。使用TDI CCD，尽管信号积分时间比传统的流式细胞仪长几个数量级，但仍可避免图像拖尾。每个像素用12位比特分辨率数字化，提供每像素10的三次方的最小动态范围。

CellStream仪器性能

流式细胞仪系统，拥有zl光学元件和可灵活配置的7种激光器

CellStream流式细胞仪以紧凑的设计提供多参数检测功能和卓越的灵敏度。使用Amnis成像型流式细胞仪zl光学系统，可快速捕获低解析度细胞图像并将其转换为强度数据

CellStream流式细胞仪以紧凑的设计提供多参数检测功能和卓越的灵敏度。使用Amnis成像型流式细胞仪zl光学系统，可快速捕获低解析度细胞图像并将其转换为强度数据

请在此处下载CellStream应用方案。

 高荧光灵敏度：8峰彩虹珠

下面使用基于工业标准的8峰彩虹校准珠来演示荧光灵敏度。 CellStream流式细胞仪可清晰地分辨每个检测通道上的所有8个峰，具有低MESF（等效可溶性荧光色素分子）值：

• MESF<10 FITC

• MESF<5 PE

微小亚微米粒子检测

微珠尺寸数据显示了CellStream平台上小颗粒的优异检测和识别。

卓越的小颗粒检测：微珠尺寸数据
Megamix-Plus FSC微珠尺寸的数据采集包含比例为4：2：1的300nm，500nm和900nm的标准珠。仪器设置：70mW侧向散射激光，10%前向散射，200mW 488nm激光，慢速采集。

10色免疫表型分析

在这个例子中，4激光CellStream系统在一次测定中准确地分辨出10种不同的荧光染料。以下数据显示了在外周血细胞样本中如何清晰地分辨出不同的免疫细胞群。

Amnis^® CellStream^®超高灵敏度多色流式细胞仪

新型Amnis^® CellStream^®台式流式细胞仪是Amnis^®流式系列的成员之一，采用了先进的Amnis^®成像型流式细胞仪所独有的光学zl检测技术，具有超高的灵敏度和灵活性，且设计紧凑，占用空间小，使用便捷。仪器可根据研究人员的科研需求和预算进行个性化定制以及后续的升级，轻松实现多参数检测。

仪器特点：

·         zl光学检测系统：CellStream流式细胞仪系统应用zlTDI-CCD进行信号采集，可快速捕获细胞图像并转换为荧光强度数据输出。

·         超高荧光灵敏度：CellStream流式细胞仪因其独特的技术和稳定的性能，荧光灵敏度可达到 FITC<10 MESF，PE<5 MESF。特别适用于弱阳性信号以及微粒如外泌体的检测。

·         配置灵活：CellStream系统可以配置1到7个激光器。激光升级可在您的实验室快速完成，无需返厂升级，减少停机时间。

·         独特的细胞图像实时预览功能：CellStream数据采集软件具有独特的图相采集功能，可对细胞群体进行验证，圈选正确的细胞群体，去除粘连体细胞。

·         同时配备了单管和96孔板高通量自动上样系统，无需再另行选配添加，自动完成样品混合和清洗步骤，实现无人值守的高通量采集。                                            

Spherotech 8 峰彩虹校准微珠结果

自动上样系统

独创的数据收集软件可实时通过细胞图像实现群体验证

在实验过程中，经常会受到一些非单细胞事件的干扰，不同于任何其他非成像流式细胞仪，CellStream自带的软件系统具备简单、直观、独创的细胞图像预览功能，可对获取的每个单细胞进行视觉验证；检测过程中可获得流动细胞的实时图像，能够帮助验证可疑群体，排除故障。特别是对单细胞、双粘体和多聚体的精确识别，可以帮助实验人员大幅提高数据质量和准确性。

检测过程中可实时获取细胞图像 

自动对每个通道进行计算，对双粘体进行准确辨别

利用CellStream系统研究胞外囊泡 (EV) 分型

细胞外囊泡（EV）作为细胞间通讯关键介质的重要性近年来引发了热烈关注。EV 是膜衍生结构，包括外泌小体、微囊泡和凋亡小体。此研究中，CD235ab–PE 标记红细胞来源的细胞外囊泡，CD41-APC 标记血小板来源的细胞外囊泡，用PBS分别进行 1:60, 1:120, 1:240, 1:480 和1:960的稀释, 对照组为仅含抗体组、仅含PBS 组、Triton-X 100(TX)+ 抗体组、TX + EV组

实验结果

·      找到潜在EV群体

图(A)显示在FSC 和SSC 坐标图中圈出潜在的EV 群体；图(B)圈出PE+群体和图(C)圈出APC+ 群体，分别是CD235ab-PE+EVs 和 CD41-APC+EVs

·      梯度稀释的EVs浓度检测以及EVs与对照组的比较

背景对照验证潜在 EV 群体

·      样本经浓度梯度稀释后，检测平均荧光强度

梯度稀释 CD235ab-PE⁺EVs 和 CD41-APC⁺EVs后检测到平均荧光强度一致

通过对PE +和APC +群体进行简单的圈门分析，能够将红细胞来源的EVs与血小板来源的EVs分开，体现了CellStream系统小颗粒检测（Small Partical Detection, SPD）模式下的高灵敏度特点。同时也表明 CellStream®流式细胞仪的高灵敏度可使其成为检测EVs及其免疫表型的绝佳平台。

高灵敏度流式细胞术分析细胞外囊泡免疫表型

仪

		非成像流式	非成像流式	非成像流式	成像流式	成像流式
		Guava® Muse® Cell Analyzer	Guava® easyCyte™ Flow Cytometer	Amnis® CellStream® Flow Cytometer	Amnis® FlowSight® Imaging Flow Cytometer	Amnis® ImageStream®X Mk II Imaging Flow Cytometer
属性		简单	通用	高灵敏度	可视化	最强大
激光数		1	1-3	1-7	1-4	1-6
检测器		PMT	PMT	CCD-TDI	CCD-TDI	CCD-TDI
参数	荧光强度	3	高达 14	高达 22	高达 12	高达 12
	形态学	N/A	N/A	3	>1,000	>1,000
放大倍率		N/A	N/A	N/A	20X	高达 60X
试剂盒		预混试剂盒	开放	开放	开放	开放
灵活性		低	中	最高	高	最高
显微镜功能		无	无	无	有	有