WAVE核苷酸片段分析技术是近年来发展起来的一项新的分析技术,它是分离核苷酸片段及分析检测已知基因突变和SNP的zei佳技术平台,其原理是在液相色谱仪的基础上采用Transgenomic公司zl技术的DNA分离柱及相应的配套数据工作站,实现对DNA片段大小的分离,DNA碱基突变的检测,寡核苷酸(OLIGO),RNA,反义-OLIGO和siRNA的分析和纯化。
DHPLC变性高效液相色谱的商品化仪器WAVE核苷酸片段分析系统作为一种常规分析工具逐渐被越来越多的分子生物学实验室所采用,用来对双链DNA片段大小及可能的未知SNP和突变进行快速分析及分离鉴定。
自2006年美国Transgenomic公司对WAVE核苷酸片段分析系统进行全面升级,推出WAVE4500系列产品,4500系列具有更快速精确的变温控制系统,每日zei大处理样品量为400个PCR产物,而数据处理时间仅为1小时,若采用Pooling的方式,紫外检测器可提高通量10倍,而荧光检测器可提高灵敏度100倍。
WAVE系列产品分为:WAVE4500、WAVE4500HT、WAVE4500HT-HS、WAVE MD、WAVE Oligo和WAVE Microbal Analysis System共计六个型号的产品。
WAVE核苷酸片段分析系统(DHPLC变性高效液相色谱)的核心技术在于:
1. DNA分离柱(Transgenomiczl)
• 无孔多苯乙烯-二乙烯基苯 (PS-DVB)共聚物微球(3微米)与C18形成稳定的固相基质;
• pH值工作范围: 2-14;
• 温度工作范围: 20-95℃;
• 可以在DNA非变性(50-52℃),部分变性(53-78℃)和完全变性(80℃)条件分析和分离核苷酸片段;
• DNA Sep分离柱寿命大于6000次进样;
• 可完成从分析(0.1nmol)到制备(5mmol)大样品浓度变化;
• 重复精度: £ 1%;
• 色谱柱可再生使用;
2. WAVEMaker WAVE核苷酸片段分析系统专用软件包功能(安装在主机计算机内):
• 可预测DNA片段变性温度(Tm值);
• 可预测DNA片段给定温度下,每一不同位置碱基变性的百分比;
• 可根据不同DNA片段,控制WAVE核苷酸片段分析系统中缓冲液的梯度条件;
• 可预测给定DNA片段流出分离柱的保留时间;
• 可实时数据采集;
• 结果数据处理(RT-PCR);
• 帮助设计DNA片段PCR引物;
WAVE核苷酸片段分析系统(DHPLC变性高效液相色谱)主要用于:
• DNA片段已知和未知突变和多态性的筛查;
• 植物基因自动分析;
• 肿瘤流行病学的研究;
• 分子遗传病学的研究;
• 法医学和亲子关系研究;
• 种群研究;
• 其他与基因相关联疾病诊断的研究;
• 分子生物学技术质量控制;
变性高效液相色谱(Denaturing High Performance Liquid Chromatography,DHPLC)是一种新的高通量筛选DNA序列变异的技术,其原理是利用离子对反向高效液相色谱原理,通过一个DNA分离柱,进行核苷酸片段的分离和分析。该方法具有自动化、快速、检出率高、检测DNA片段大小范围广等优点。自2006年美国Transgenomic公司对WAVE核苷酸片段分析系统进行全面升级,推出WAVE4500系列产品,4500系列具有更快速精确的变温控制系统,日zei大处理样品量400个PCR产物,而数据处理时间仅为1小时,若采用Pooling的方式,紫外检测器课题高通量10倍,而荧光检测器可提高灵敏度100倍。
应用范围:
DHPLC能以三种方式操作,不同的操作方式采用的原理不同,其适用的范围也不同。
1、不变性温度条件下(50℃),色谱仪类似凝胶电泳仪,可分离分子量不同的双链DNA分子或分析具有长度多态性的片段,类似RFLP分析,也可进行定量RT-PCR及微卫星不稳定性测定(MSI)。
2、在充分变性温度条件下(80℃),单链DNA或RNA分子能被区分,适用于寡核苷酸探针合成纯度分析和质量控制。
3、在部分变性的温度条件下,变异型和野生型的PCR产物经过变性复性过程,不仅分别形成同源双链,同时也错配形成异源双链,根据柱子保留时间的不同将同源双链和异源双链分离,从而识别变异型。根据这一原理,可进行基因突变检测、单核苷酸多态性分析(SNPs)和短片段串联重复序列分析(STRs)。
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