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Access Array高通量靶标区段重测序捕获系统

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思百拓基因/DNA测序仪, Access Array系统是一个高通量样本中将用于高通量重测序的靶标区段富集捕获的平台。该平台结合了微流控芯片的低成本、高通量和PCR灵活可靠的特性。大大减少科研人员进行基因突变检测,甲基化研究,宏基因组研究和单细胞基因研究等重测序工作的实验时间,劳动力和成本,获得稳定可靠的数据。

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技术特点

【技术特点】-- Access Array高通量靶标区段重测序捕获系统


特点:

具体

95%的扩增子映射到目标,享受高质量的结果。

敏感

从50 ng输入DNA中获得您想要的结果。

准确

通过简化的工作流程减少错误,仅需20分钟的实际操作时间。

兼容

适用于所有主要的新一代测序仪器,如HiSeq®,MiSeq™和Ion PGM™。

技术:

通过Fluidigm独有的集成流体回路(IFC)和控制器的组合,Access Array使用独特的标记协议创建扩增子文库,其中引物将样品特异性条形码序列和测序仪特异性标签附加到每个PCR产物。多重引物为少数用户定义的基因构建文库,从数百个基因中获得多达4,800个扩增子的更全面的组,并且条形码序列允许您在一个多重测序运行中运行多达384个样品。




Access Array系统是一个高通量样本中将用于高通量重测序的靶标区段富集捕获的平台。该平台结合了微流控芯片的低成本、高通量和PCR灵活可靠的特性。大大减少科研人员进行基因突变检测,甲基化研究,宏基因组研究和单细胞基因研究等重测序工作的实验时间,劳动力和成本,获得稳定可靠的数据。

Access Array为开放平台,科研人员可以选择任何的目标捕获富集策略用于其上,如扩增子标签后重测序,长片断PCR等。

 

制备测序文库

 

不论你采用哪种测序仪进行目标测序都需要制备测序文库,这种文库中的分子需要在目标区段的两端接上用来克隆扩增或测序的接头序列。由于PCR的特异性和灵敏性的特点,它被用在各种用来生成扩增子(amplicon)文库的方法中。所有这些方法制备扩增文库都很容易遇到一个瓶颈,这是因为传统的方法制备文库对样品及引物对的数目增加有很大限制。捕获芯片可以完成用其他方法无法想象的样品量的目标序列重测序。

 

可放大性

 

捕获芯片系统由于使用模块设计和简单工作流程,所以具有很高的可放大性。一个捕获芯片制备的测序文库可以很理想的在不同的桌面型的小型二代测序仪上进行一次完整实验,而多个芯片制备的文库可以集成到一起来满足最大型的二代测序仪的通量。

 

目标序列重测序的简化

 

捕获芯片系统可以进行最高质量的高通量目标重测序同时还能减少实验材料:

 

每个样品只需要50纳克的基因组DNA,而石蜡包埋的组织样品也有专门的操作流程。

样品和引物在芯片上自动混合,减少了移液步骤和手工操作,避免移液错误。

PCR反应体积是有微流体芯片的设计结构统一控制,保证PCR反应之间及不同实验之间的高度一致性。

捕获芯片的条形码文库包含测序系统所需的特定接头序列,提供384个独特的10碱基条形码。

引物和PCR条件具有减少引物二聚体的设计并保证不同PCR扩增子之间的均一性。

 

在扩增子标记的实验流程中,设计的引物保证每个PCR产物带有样品特异的条形码序列和测序平台特定的标签序列。条形码序列使多达384个样品可以合并到一起在一个多重测序反应中一起测序。

 

Fluidigm用于Illumina测序平台的4-引物标记实验流程显示如右图。如果需要在其他第二代测序平台上使用这个实验流程,只需简单地将Illumina特定的接头序列换成你所用的测序平台相匹配的接头序列即可。其他测序平台所用的条形码可以加到产物两头的接头序列上。

 

引物扩增子标记

 

尽管Fluidigm公司的捕获芯片可以用于几乎所有基于PCR的样品富集方法,但最理想的还是用Fluidigm的4-引物扩增子标记流程和试剂来制备可用于所有第二代测序平台的扩增子文库。在4-引物扩增子的标记中,在目标序列特定的引物的5撇端加上的引物标签序列和测序接头序列是通用的,这样用户只需设计和验证目标特异引物而不需要考虑测序平台的种类及检测样品所需的多重程度。条形码序列寡核苷酸都带有通用序列接头,是4-引物扩增子标记流程的通用试剂,它们可以和任何目标基因特异的引物一起使用,这样就大大减少了进行多个目标重测序实验所需的独特寡核苷酸的数量。

 

富集序列的均一性

捕获芯片提供高质量的数据,使得多个目标和多个样品之间的序列在测序文库中据有很好的均一性,这样才能达到二代测序的使用最大化。下图中显示了从48个基因组DNA样品中用48对不同的序列特异的引物对在捕获芯片上产生的2304个扩增子的数量分布情况。大于95%的扩增子的数量平均都在2倍范围内。测序文库中的产生的扩增子越均一,所获得的测序读数在所有样品中的分布就越平均,而测序花费的时间和经费才会越少。

 

多重PCR以提高测序涵盖率

 

每个样品可富集的序列数量可以利用多重PCR来放大。一个样品利用单重PCR可以富集48对引物扩增的序列,如果利用10重PCR这可以增加到富集480对引物扩增的序列。为捕获芯片而开发的独特的实验流程和集合微流体芯片可以防止10重PCR可能带来的序列均一性在数据质量上的损失。

 

使第二代测序的目标重测序的承诺变成现实

 

捕获芯片目标特异引物

 

捕获芯片的目标特异引物可以让您充分利用捕获芯片系统,使用最少的实验准备时间但获得有力的结果。捕获芯片提供快速、简单、便宜的方法制备直接可以测序的文库,帮助您达到您的第二代测序的目标。

 

不像其他预先模块化的捕获技术,捕获芯片目标特异引物是根据您的要求特别设计的。使用捕获芯片,这些引物可以制备48个不同样品的高达480个不同的扩增子。您只需要提供您感兴趣的人类基因组的区段,我们将设计引物系列用来扩增标记测序用的PCR产物。我们提供:

 

96孔板装有集成的正向和反向引物

电子表格提供扩增子及引物序列

连接加州大学圣克鲁斯分校(UCSC)基因组浏览器,显示图像定位的扩增子位置

提供电子版实验流程

 

捕获微流体集成芯片

 

捕获微流体集成芯片是一种Fluidigm公司的微流体集成芯片zl产品,它可以让研究人员进行纳米体积的高通量PCR。每一个微流体反应腔可以容纳多达10种不同的扩增子,使得一个单独PCR试验可以在48个样品富集多达480个扩增子。


 

Access Array高通量靶标区段重测序捕获系统 主要特性:


高通量

单张Access Array芯片可进行捕获48个样本,每个样本可以捕获48-480个靶标区段

每个样本加上唯一的Barcode序列,Access Array Barcode库支持将数百个样本的靶标区段混到一起进行高通量测序


容易使用

Access Array后的产物均已加上样本唯一的Barcode序列和高通量测序仪Adapter,减少测序文库制备的繁琐步骤。

整个工作流程只需5个步骤,耗时4小时,人手工作只需20分钟。


灵活性

开放平台,多种捕获富集策略可选,如扩增子标签后重测序,长片断PCR等。

用户自定义内容使该系统的能灵活运用到任何物种的任何区段捕获研究,

Access Array content service定制设计服务可根据客户客户选择的区段进行设计,提供客户验证后的引物。


% amplification success (for ≤65% GC content) 

   ≥95%

Input DNA requirement

   50 ng

Through-put per chip

48samples,48-480 amplicons per sample

Amplicon size

 Depends on sequencer platform

 


简易的工作流程

 

整个目标富集试验从基因组DNA到完成扩增子文库只需要5步人工操作、4个小时、以及很少的手工操作时间即可完成。
Access Array高通量靶标区段重测序捕获系统工作流程






【技术特点对用户带来的好处】-- Access Array高通量靶标区段重测序捕获系统


【典型应用举例】-- Access Array高通量靶标区段重测序捕获系统



厂家资料

地址:上海徐汇区中山西路1600号宏汇国际广场A1709室

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