上海中科新生命生物科技有限公司
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常见问题
1.怎样避免角蛋白的污染？
- 常见的角蛋白有四种，主要是从皮肤屑（直接接触）和头皮屑（空气传播）中来的。
- 质谱中检测到的角蛋白峰应该是在酶解前就进入样品中来的（主要是在染胶，脱色，切胶和加酶这四步）。
- 试验中一定要佩戴手套；一定要仔细清洗染胶的容器（先用 70 ％酒精洗，再用去离子水洗）；切胶要带口罩，并在通风橱中进行。
- 另外，从来源于实验操作人员穿着的毛衣中的角蛋白也被检测到过，所以试验中要穿试验服。
2．蛋白质浓度很低，用什么方法来浓缩？
- 蛋白质的浓缩有很多方法。大致有超滤法，沉淀法和透析法。
- 超滤比较温和，对蛋白质不会有修饰和改变，蛋白的种类一般不会有丢失。它的缺点是总样品的量可能会减少（被膜所吸附）。另外超滤对样品的要求比较高。甘油，去垢剂都会堵塞滤膜，影响超滤的效果。
- 沉淀法比较快速，容易操作，对盐，甘油，去垢剂的耐受性好。缺点是可能会有部分种类的蛋白没有被沉淀下来（丢失）。
3. 怎样邮寄我的样品？
- 冻干的胶或干粉可以直接邮寄。
- 切胶后的湿胶（不用做任何处理），放在 EP 管中 ( 不加任何缓冲液 ) ；用干冰速冻；邮寄时，置样品于足够的干冰中。
- 液体样品的邮寄方式同湿胶一样。
4. 胶上蛋白质的鉴定，我应该提供多少蛋白质？
- 一般情况下，考染能看得见的点都有机会鉴定出来。
- 分子量在 2 － 5 万之间的蛋白质，鉴定成功率一般比较大。
- 分子量小的蛋白酶切位点少，合适的肽段（ 1000 ～ 3000 Da ）就少，所以鉴定的成功率相对较低。
- 而分子量太大的蛋白质，在同等质量的情况下，蛋白的摩尔数 (pmol) 较少；而且查库时匹配肽段的覆盖率会比较低（因为整个蛋白质较大），从而影响鉴定的成功率。
注意事项：若以个人账户汇款，请在汇款时注明所属单位及课题组（若无课题组可不注明），以便于及时安排项目和查询。
