- 科研工具
分子量和等电点计算
Compute the theoretical pI and Mw from a SWISS-PROT or TrEMBL entry or for a user sequenc......
- ICAT (Isotope-coded affinity tag )
原理
该技术由Gygi等提出，它主要是使用了一种称为ICAT的化学试剂。其结构主要由3部分构成：
(1)亲和标签(生物素，biotin)，用来分离ICAT标记的多肽；
(2)连接子，用来整合......
- SILAC (Stable Isotope Labeling with Amino Acids in Cell Cultures)
2002年，丹麦Mann实验室的Ong等对AACT技术作了进一步改进，建立了SILAC技术并首次应用于定量蛋白质组研究，为全面、系统地定性和定量分析复杂哺乳动物细胞蛋白质组提供了有效的方案。原理：SI......
- Label-free 蛋白质组学非标记定量技术
目前，蛋白质组研究的实验技术流程一般为样品(蛋白混合物) 经二维凝胶电泳，染色，胶上蛋白酶切，进入质谱鉴定；或样品(蛋白混合物) 直接经酶切，色谱分离，进入质谱进行鉴定。
在二维凝胶电泳的实验中，......
- 定量蛋白质组学简介
自1994年澳大利亚科学家Wilkins和Williams提出蛋白质组学的概念以来，已经过去了10年，在这10年中，蛋白质组学在生命科学及医学的各个研究领域蓬勃发展。尤其是在心脑管疾病、肿瘤、糖尿病等......
- 蛋白质鉴定：shotgun 混合蛋白鉴定
原理：针对液体或SDS-PAGE条带的复杂混合物用酶（Trypsin）酶解成肽段混合物，这些肽段混合物再通过液相色谱分离(如2DLC(阳离子柱SCX和C18反相柱串联)或1DLC 的C18反相柱)，再......
- 蛋白质鉴定：考染和银染单点鉴定
方法：质谱法
原理：
一、利用MALDI-TOF质谱仪
根据肽质量指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting, PMF)与蛋白质数据库中蛋白质的理论PMF比对，就可以鉴定......
- 2D PAGE：DIGE 荧光差异蛋白表达分析
Ettan DIGE荧光差异蛋白表达分析系统在传统双向电泳技术的基础上，结合了多重荧光分析的方法，在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记（Cy2，Cy3，Cy5）的样品，并第一次引入了内标的概念，......
- 蛋白质修饰分析：蛋白质磷酸化位点分析
很多mRNA表达产生的蛋白质要经历翻译后修饰如磷酸化、糖基化、乙酰化等。翻译后修饰是蛋白质调节功能的重要方式，而在生命现象的许多关键调节机制中，蛋白质的磷酸化是重要的翻译后修饰，它与信号传导，细胞周期......
- 2D PAGE：双向凝胶电泳
双向凝胶电泳是将不同种类的蛋白质按照等电点和分子量差异进行高分辨率分离的分析方法。成功的二维电泳可以将2000到3000种蛋白质进行分离，是目前唯一的同时能分离成百上千种蛋白质的工具。通过对蛋白质双向......
- 样品全息制备
蛋白质样品制备是蛋白质组研究的第一步，无论后续采用怎样的分离或鉴定手段，样品制备都是关键步骤。从蛋白质组学大规模研究的角度出发，样品制备应尽量获得所有的蛋白信息。但是样品的来源千差万别，采取什么样的蛋......
- 圆二色谱
原理：利用蛋白质的圆二色性及不对称分子对左右圆偏振光吸收的不同来进行结构分析
仪器：圆二色谱仪
样品要求：液体：浓度>0.5mg/ml；体积>400ul；固体：质量>200ug；......
- 蛋白质的二硫键定位
方法：质谱法
原理：经过对Cys的完全还原修饰（DTT/IAA）或不完全还原修饰（TCEP）与不修饰的对比，酶解后用串联质谱法（MS2）对含有二硫键的肽段的b离子/y离子分析，确定蛋白质中二硫键的位......
- 蛋白质氨基酸组成分析
原理：用盐酸在110℃将蛋白或多肽水解成游离的氨基酸，用氨基酸分析仪测定各氨基酸的含量。
仪器：氨基酸组成分析仪
样品要求：样品纯度>95%；蛋白总量>200ug
实例分析：某样品......
- 多肽序列分析（非标准氨基酸）
原理：多肽在质谱中的碎裂有一定规律，通常最容易断裂的是肽键位置。得到分别命名为b离子（从N端）和y离子（C端）的M/Z的图谱，从而进行多肽序列分析。
仪器：BrukerAutoflex Ⅱ
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- 蛋白质等电点测定
方法：平板等电聚焦
原理：蛋白质分子在含有载体两性电介质形成的连续而稳定的线性pH梯度中进行电泳。但不自是按照等电点不同被分离。
仪器：Bio-Rad Model 111Mini IEF ......
- 蛋白质一级结构分析
方法：质谱法原理：采用质谱技术通过对样品与其理论序列的匹配和肽段覆盖率来确证样品的序列。仪器：Finnigan LCQ Deca Xp / Finnigan LTQ
样品要求：挥发性无机盐<......
- 蛋白质分子量测定
方法：质谱法
原理：蛋白质分子离子化后通过质量分析器对其质荷比进行分析，或进一步通过算法（如高斯算法）得到样品的精确分子量。
仪器：BrukerAutoflex Ⅱ(MALDI-TOF-TOF-M......
- 质量肽谱图
原理：样品蛋白质先经过酶解，用基质辅助计量解析-飞行时间质谱（MALDI-TOF）根据各肽段不同分子量的飞行时间不同对样品进行分离，得到质量肽谱图
仪器： BrukerAutoflex Ⅱ (MA......
- HPLC肽谱图
原理：样品蛋白先经过酶解后进入HPLC，通过反相色谱柱根据肽段的不同保留时间进行分离，得到HPLC肽谱图。
仪器：
Agilent HPLC 1090 /Agilent HPLC 1100
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