夏天无生物碱的高速逆流色谱分离纯化
摘 要 采用pH2区带精制逆流色谱与常规高速逆流色谱相结合的方法快速分离纯化夏天无总生物碱。利用pH2区带精制逆流色谱对夏天无总生物碱进行分离,以正己烷2乙酸乙酯-甲醇-水(5∶5∶2∶8, V /V , 上相加5 mmol/L三乙胺,下相加5 mmol/L HCl)为溶剂系统,上样量3. 0 g,分离得到1个混合物和3个高纯度的生物碱单体:原阿片碱(375 mg) 、苏元胡碱甲(362 mg)和比枯枯灵(246 mg) , 其纯度分别为97. 5% , 95. 6%和9711%。所得混合物850 mg经常规高速逆流色谱二次分离,以正己烷2乙酸乙酯2甲醇2水( 1 ∶0. 8 ∶1. 1∶1,V /V )为溶剂系统,得到比枯枯灵(105 mg)和四氢巴马亭(470 mg)单体,纯度分别为99. 1%和99. 7%。从该药材分得苏元胡碱甲,两种制备分离模式相结合,提高了夏天无生物碱的分离效率。
夏天无为罂粟科植物伏生紫堇(Corydalis decum bens (Thunb. ) Pers. ) 的干燥块茎,具有活血通络,行气止痛的功效,主要用于治疗中风偏瘫、跌扑损伤、风湿性关节炎、坐骨神经痛等[ 1 ] 。夏天无的主要活性成分为生物碱类化合物,如原阿片碱、比枯枯灵和四氢巴马亭等[ 2, 3 ] 。建立主要活性成分的分离制备方法,对夏天无药材及其产品的质量控制十分必要。传统的柱层析方法存在耗时长、容易造成样品的不可逆吸附、变性及样品回收率低等缺点。高速逆流色谱(HSCCC)是一种不用固态载体的液2液分配色谱,它根据样品在两相溶剂中分配系数的不同实现样品的分离,可有效避免因不可逆吸附引起的样品损失、失活、变性等,已广泛应用于天然产物的分离和提纯[ 4～8 ] 。pH2区带精制逆流色谱(pH2ZRCCC)是在HSCCC基础上发展起来的特殊分离制备技术,依据化合物的解离常数( Ka )和疏水性的不同而实现分离,适合于有机酸、有机碱制备性分离,具有制备量大和分离馏分高度浓缩纯化的特点[ 9 ] 。本研究采用pH2区带精制逆流色谱结合常规高速逆流色谱对夏天无总生物碱进行分离纯化,快速分离制备出4个高纯度的生物碱单体: 原阿片碱、苏元胡碱甲、比枯枯灵和四氢巴马亭 。
