用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——ATP储存液的配制

2019.4.05

试剂、试剂盒	ATP储存液
实验步骤	一、Mg-ATP 储存液的配制 ATP 买来时通常是钠盐。大多数激酶需要 ATP 镁盐作为高效底物。有时可以用锰代替镁。 1. 20 mmol/L MgCl₂ 或 MgSO₄ 2. 20 mmol/L Na₂-ATP 以 1:1 的比例混合这两种溶液，测 pH 值。慢慢将 pH 值调至 pH 7.4。如果出现沉淀，应继续搅拌，并要保持 pH 值在 pH 7.4。这就配成了 10 mmol/L 的 Mg-ATP 储存液。将溶液分成小份保存于 -20℃，可以放一年以上。二、[γ-³²P] ATP 使用液的配制 [γ-³²P] ATP 供应商有 Amersham Int、NEN 和 ICN；通常可以买到不同比活性的 [γ-³²P] ATP。适宜使用的比活性是 3000 Ci/mmol，通常刚买来时的浓度是 10 mCi/ml。Amersham’s Rerfivue [γ-³²P] ATP 溶液用起来很方便，因为它可以保存于 4℃ 而不是 -20℃。展开

试剂、试剂盒

实验步骤

一、Mg-ATP 储存液的配制

ATP 买来时通常是钠盐。大多数激酶需要 ATP 镁盐作为高效底物。有时可以用锰代替镁。

1. 20 mmol/L MgCl₂ 或 MgSO₄

2. 20 mmol/L Na₂-ATP

以 1:1 的比例混合这两种溶液，测 pH 值。慢慢将 pH 值调至 pH 7.4。如果出现沉淀，应继续搅拌，并要保持 pH 值在 pH 7.4。这就配成了 10 mmol/L 的 Mg-ATP 储存液。将溶液分成小份保存于 -20℃，可以放一年以上。

二、[γ-³²P] ATP 使用液的配制

[γ-³²P] ATP 供应商有 Amersham Int、NEN 和 ICN；通常可以买到不同比活性的 [γ-³²P] ATP。适宜使用的比活性是 3000 Ci/mmol，通常刚买来时的浓度是 10 mCi/ml。Amersham’s Rerfivue [γ-³²P] ATP 溶液用起来很方便，因为它可以保存于 4℃ 而不是 -20℃。