1. 将膜放入可热密封的塑料袋，加5 ml 封闭液，密封塑料袋，在旋转摇床或摆动平台中摇动30~60 min。 2. 用封闭液稀释第一抗体（取决于抗体和检测系统，以1：10~1：100 000稀释）。
3. 打开袋子，倾去封阻液，以稀释的第一抗体工倾代替之。在室温下持续摇动30~60 min。
4. 带着手套从塑料袋子中取出膜，放在塑料盒子中摇动着用200 ml TTBS（硝酸纤维素膜或PVDF膜）或TBS（尼龙膜）洗4次，每次10~15 min。
5. 用封闭液稀释HRPO或AP抗Ig抗体偶联物。
6. 将膜放进一新的可密封塑料袋子，加入稀释的HRPO抗Ig抗体偶联物。在室温持续揺动30~60 min。
7. 从塑料袋中取出膜，并按步骤4冼膜，按合适的显迹方法处理膜。 展 | 
