转移因子的制备及检测实验
实验概要
本实验采用透析法制备了转移因子(TF)，并进行了检测。
实验原理
TF是一种可溶性不耐热的小分子多核苷酸肽，分子量约3 500～5 000。56℃30min可灭活，低温保存数年活性不消失。由于转移因子能将供体某种特定的细胞免疫功能，特异地传递给受体，即具有传递特异性细胞免疫的作用，所以称为转移因子。另外它还能非特异地增强一般细胞免疫作用。转移因子的作用发生迅速，给受体注射后数小时即出现皮试阳性反应。维持时间也较长，可达数月至一年以上。转移因子具有免疫特异性，能特异地转移供体的迟发型超敏反应，这种免疫转移无种属特异性，能在种间交叉转移。由于转移因子是小分子成分，无抗原性，长期应用，机体也不产生抗体。在实际工作中多采用动物的脾、淋巴结或外周血白细胞制备转移因子。
主要设备
高速组织捣碎机、低温冰柜、离心机、透析袋、紫外分光光度计及E玫瑰花环试验所用器材等。
实验步骤
1. 制备匀浆：将冻存的猪(人)脾脏或淋巴结取出融化，摘除脂肪及结缔组织，充分洗净。用绞肉机绞碎，加适量生理盐水后，用高速组织捣碎机高速匀浆2次，每次1min。将匀浆置-20℃冻结。
2. 透析含量测定及冻干：将上述匀浆取出融化，以3 000r/min离心30min，取上清，将上清置透析袋内，用无热原的冷生理盐水在0～4℃环境下透析过夜，袋外透析液即为制备的转移因子。取袋外透析液测核糖含量及吸收度，按测定结果进行分装并冻干。
3. 检定
1) 鉴别
a. 取本品1支，加水溶解，按分光光度法测定，在251±1nm处有最大吸收度；260nm与280nm波长处吸收度比值应≥20；
b. 取本品1支，加水溶解。取2ml加入适量茚三酮溶液，加热后应呈紫色。
2) 酸碱度
取本品10支，加水溶解，在酸度计上精密测定pH值，应为6.0～8.0。
3) 蛋白质
取本品1支，加水溶解，加入磺基水杨酸试液适量，混匀不得出现混浊。
4) 水分
按碘硫溶液法测定，不得超过3%。
5) 安全试验
取本品适量，加水溶解，小鼠尾静脉注射适量，48h内不得有死亡。
6) 热原
取本品1支，加水溶解依法检查，应符合规定。
7) 菌检
取本品3支，用无菌盐水溶解，分别接种到检查需氧菌、厌氧菌及霉菌用培养基上，37℃培养1周，应无菌生长。
8) 核糖
以标准D核糖为标准品，取本品3支分别测定，每支含核糖均不得低于60μg。
9) 吸收度
取本品5支，加水溶解，用分光光度法进行测定，其吸收值应为0.55左右。
10) 超敏反应
取健康无伤豚鼠6只，每只腹腔注射本品适量，连续3次，于20日后再自耳静脉注入本品适量，应无超敏反应现象发生。
11) 乙肝抗原及抗体测定
取本品1支，加水溶解，以放免法测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBcAg、HBcAb，应为阴性。
12) 活性
采用E玫瑰花环试验，对照管中加入淋巴细胞及绵羊红细胞，试验管中加入淋巴细胞、绵羊红细胞及适量本品。试验管E玫瑰花环率应较对照管高20%以上。
注意事项
1. 所用脏器应新鲜，匀浆时应彻底捣碎。
2. 各步所用蒸馏水均无热原。
3. 转移因子常温下易丧失活性，因此，有关操作(如透析)应在低温下进行。常温下的各种操作均应快捷迅速。
