辣椒制品中苏丹红I的快速检测 胶体金免疫层析法（一）

1　范围

本方法规定了辣椒制品中苏丹红I的胶体金免疫层析快速检测方法。

本方法适用辣椒酱、辣椒油、辣椒粉中苏丹红I的快速测定。

2　原理

本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的苏丹红I与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化，通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中苏丹红I进行定性判定。

3　试剂和材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

3.1　试剂

3.1.1　乙腈。

3.1.2　无水硫酸镁。

3.1.3　正己烷。

3.1.4　二氯甲烷。

3.1.5　氢氧化钠。

3.1.6　氢氧化钠溶液（2mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.5）8g，用水溶解并稀释至100mL。

3.1.7　无水乙醇。

3.1.8　复溶液：将无水乙醇（3.1.7）与水按照体积比25:75混匀。

3.2　参考物质

苏丹红I参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥95%。

表1 苏丹红I参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量

注：或等同可溯源物质。

3.3　标准溶液的配制

3.3.1　苏丹红I标准储备液（1mg/mL）：精密称取苏丹红I参考物质（3.2）适量，置于10mL容量瓶中，加入适量乙腈（3.1.1）超声溶解后，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1mg/mL的苏丹红Ⅰ标准储备液。-20 ℃避光保存，有效期6个月。

3.3.2　苏丹红I标准中间液（1μg/mL）：精密量取苏丹红I标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）100μL，置于100mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的苏丹红I标准中间液。

3.4　材料

3.4.1　固相萃取柱：CNW Poly-sery MIP-SDR固相萃取柱（200mg/3mL），或相当者。

3.4.2　苏丹红I胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为辣椒酱、辣椒油、辣椒粉。

3.4.2.1　金标微孔。

3.4.2.2　试纸条或检测卡。

4　仪器和设备

4.1　移液器：200μL、1mL和5mL。

4.2　涡旋混合器。

4.3　离心机：转速≥4000r/min。

4.4　电子天平：感量为0.01g。

4.5　氮吹仪。

4.6　水浴锅。

4.7　环境条件：温度15℃～35℃，湿度≤80%。

5　分析步骤

5.1　试样制备

取适量样品，液体样品或半固体样品充分混匀，固体样品充分粉碎混匀。

5.2　试样的提取

5.2.1 辣椒酱

称取辣椒酱2g（精确至0.01g）于15mL离心管中，加入0.5g无水硫酸镁（3.1.2）和5mL正己烷（3.1.3）提取液，涡旋振荡1min后，4000r/min离心5min。将上清液全部加入到固相萃取柱（3.4.1）中，流出液弃去。再加入6mL正己烷淋洗固相萃取柱，流出液弃去。用2mL二氯甲烷（3.1.4）洗脱固相萃取柱，收集洗脱液吹干。精密加入400μL复溶液（3.1.8），涡旋混合1min，作为待测液，立即测定。

5.2.2 辣椒油

称取辣椒油5g（精确至0.01g）于15mL离心管中，加入8mL正己烷（3.1.3）进行提取，涡旋振荡1min后，将上清液全部加入到固相萃取柱中，流出液弃去。再加入6mL正己烷淋洗固相萃取柱，流出液弃去。用2mL二氯甲烷（3.1.4）洗脱固相萃取柱，收集洗脱液吹干。精密加入400μL复溶液（3.1.8），涡旋混合1min，作为待测液，立即测定。