二、材料待测的DNA 模板，可用双链或单链模板。

三、设备高压电泳仪，测序用电泳槽，照相显影用大号塑料盆，制胶设备，吹风机，放射自显影盒，X-光片。

四、试剂

1、5×T7 DNA 聚合酶缓冲液：200mmol/L Tris・Cl，pH7.5，100mmol/L MgCl2，250mmol/L NaCl。

2、引物：使用通用引物pUC/M13正向或逆向引物。

3、DTT ： 0.1mol/L。

4、5×常规标记混合物：7.5mmol/L dGTP，7.5mmol/L dCTP，7.5mmol/L dTTP。

5、5×dITP标记混合物：15mmol/L dITP，7.5mmol/L dCTP，7.5mmol/L dTTP。

6、dNTP A溶液（适用于dGTP): 80mmol/L dGTP，80mmol/L dATP，80mmol/L dCTP，80mmol/L dTTP，50mmol/L NaCL。

7、ddG终止混合物 (适用于dGTP)：dNTP A溶液再加 8mmol/L ddGTP。

8、ddA终止混合物 (适用于dGTP)：dNTP A溶液再加 8mmol/L ddATP。

9、ddT终止混合物(适用于dGTP)：dNTP A溶液再加 8mmol/L ddTTP。

10、ddC 终止混合物(适用于dGTP)：dNTP A溶液再加 8mmol/L ddCTP。

11、dNTP B溶液（适用于dITP): 160mmol/L dITP，80mmol/L dATP，80mmol/L dCTP，80mmol/L dTTP，50mmol/L NaCl。

12、ddG终止混合物(适用于dITP)：dNTP B溶液再加1.6mmol/L ddGTP。

13、ddA 终止混合物(适用于dITP)：dNTP B溶液再加1.6mmol/L ddATP。

14、ddT 终止混合物(适用于dITP)：dNTP B溶液再加1.6mmol/L ddTTP。

15、dd C终止混合物(适用于dITP)：dNTP B溶液再加1.6mmol/L ddCTP。

16、测序用T7 DNA 测序酶。

17、酶稀释缓冲液：10mmol/L Tris・HCl，pH7.5，5mmol/L DTT，0.5mg/ml BSA 。

18、终止溶液： 95%甲酰胺，20mmol/L EDTA，0.05%溴酚兰，0.05%二甲苯兰 。

19、[a-32P]dATP 或[a-35S]-dATP，35S的优点是可使条带为窄而清晰，并且操作更为安全。放射强度为：1000-1500Ci/mmol，10mCi/ml。

20、TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA，pH7.5。

21、上节所述的凝胶制备过程中的全套试剂。

22、X光显影液：H2O：50℃ 800ml，米吐尔 2.2g，无水Na2SO3 72g，对苯二酚 8.8g，无水NaCO3 48g ，KBr 4g， 定容至1000ml备用。

23、F-5坚膜定影液：水600ml ，Na2S2O3 240g，Na2SO3 15g，冰醋酸 13.4ml；硼酸 7.5g ，粉状钾矾 15g ，定容至1000ml 备用。

24、TYP肉汁培养基：16g蛋白胨，16g酵母提取物，5g NaCl，2.5g K2HPO4，加水溶解，定容至1000ml。

25、20%PEG/3.75mol NH4Ac 溶液：40% PEG（分子量8000）储备液和7.5mol/L pH7.2 NH4Ac 储备液等体积混合。

五、操作步骤：

（一）、模板制备

1、M13单链模板制备：在转化入合适的大肠杆菌宿主菌且在含有指示剂如X-gal/IPTG的培养基上铺板之后，含有M13重组子的细胞将表现出无色的"噬菌斑"，事实上受感染的细胞并非被噬菌体溶菌或杀死，出现噬菌斑是因为被感染的细菌在生长速度上比其周围未感染的细菌慢的缘故，从无色噬菌斑上得到的感染细胞经培养便能产生测序反应所需的单链模板。