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羊水细胞染色体制备方法(原位法)

2020.9.14

细胞培养
1. 将羊水(约20ml)转移到无菌的离心管中,1000rpm离心10分钟;
2. 去除上清液,用于其它分析,保留细胞悬液约0.5~1ml,用培养基混匀到2~2.5ml左右;
3. 将细胞悬液平分到3只Chromslide培养皿中;
4. 培养24/48小时后,向每只Chromslide培养皿中加入约2.5ml羊水培养基;
5. 培养第5~6天后,对细胞生长状况进行观察,更换新的培养基;
6. 1~2天后观察细胞的生长状况,如果细胞克隆数足够,向培养皿中加入秋水仙素,收获细胞, 处理时间根据秋水溶液浓度确定。

染色体制备
1. 倾斜Chromslide细胞培养皿,完全去除培养基;
2. 加入3~4ml低渗液到每个培养皿中,室温处理10分钟;
3. 直接向低渗液中加入0.5~0.7ml固定液,室温处理5分钟;
4. 去除上清液,加入3~4ml新鲜的固定液,室温处理(处理时间不影响最终结果);
5. 重复第四步1~2次;
6. 去除固定液,在Maxchrome染色体分散仪(设定适当的参数)中进行染色体分散过程;
7. 玻片干燥后,老化,显带。

注:
1. 羊水染色体制备过程中的染色体分散程度与Chromslide的性能没有任何关系,只与分散条件相关(Maxchrome分散仪的参数设定)。
2. 秋水溶液的浓度和处理时间,参考各实验室的常规处理方法。
3. 原位法需掌握好细胞生长密度,细胞太密不利于染色体分散。
4. 玻片老化时间,根据具体情况,灵活控制。
5. 如果羊水细胞贴壁不佳,在排除了其它可能因素后,可适当多留些羊水上清液,上清液中的一些蛋白有助于羊水细胞生长的贴壁。
6. 细胞培养过程中,防止振动对细胞贴壁的影响。

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