荧光素酶报告基因的技术流程
启动子的预测
转录因子的预测
报告基因质粒的构建
实验方法及结果分析
用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。
设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。
筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。
扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。
培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。
将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。
提取蛋白并用于荧光素酶检测。
加入底物，测定荧光素酶的活性。
计算相对荧光强度，并与空载对照比较。
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