粘粒和质粒文库的扩增实验

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粘粒和质粒文库的扩增实验_基本方案

2019.3.25

文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。

实验材料	质粒
试剂、试剂盒	LB 甘油
仪器、耗材	硝酸纤维素膜培养箱
实验步骤	1. 在含抗生素的平板上加一层硝酸纤维素膜，将抗药性细菌铺在硝酸纤维素膜上，培养细菌至菌落边缘正好相接。 2. 往长满菌落的平板中加入LB培养液，10 cm 平板约加2 ml，15 cm平扳约加4 ml。用一支灭菌的细胞刮棒从硝酸纤维素膜上将菌落刮下来，形成菌悬液。 3. 将平板中的菌悬液收集到一个50 ml 塑料管中，加无菌的甘油至终浓度15%，充分混匀后分装到1 ml的小管中，每管500 μl，于-70℃冻存（这样分装的小份保存超过一年仍能存活）。 4. 筛选文库时，取出一冻存小管，解冻并滴定细菌浓度，然后将细菌铺在筛选的滤膜上。收起
注意事项	任何扩增步骤最值得关注的问题是每一个初始重组子要得到均等的扩增的机会，若重组菌的增殖率有所不同，将导致扩增文库的表现度过量或不足。

扩增实验

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