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分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

DNA裂解分析实验

2019.9.17

  • 琼脂糖凝胶电泳

  • 个体核的PI荧光

  • 乙醇固定后PI染色

  • JAM分析

           

实验材料

细胞

试剂、试剂盒

溶解缓冲液 RNA 酶A T1 混合液 蛋白酶 K DNA 加样缓冲液

仪器、耗材

Eppendorf 管 移液管 琼脂糖凝胶

实验步骤

1. 将 5X105 细胞移入无菌的 1.5 ml Eppendorf 管中，4℃ 2000 r/min 离心 5 分钟，弃上清。

2. 加入 20 μl 溶解缓冲液。用移液管尖头混匀细胞沉淀。

3. 加 10 μl RNA 酶A/T1 混合液，轻弹管尖混匀，不要形成旋涡。37℃ 孵育 30~120 分钟。

4. 加 10 μl 蛋白酶 K，轻弹管尖混匀，50℃ 孵育至少 90 min，也可过夜。

5. 加 5 μl 6X DNA 加样缓冲液，在含 0.5 μg/ml 溴化乙锭 TAE 的 1%~1.5% 琼脂糖凝胶于孔中加 DNA 样品。

6. 低电压电泳，可以促进 DNA 片段的分离。

7. DNA 序列梯最后有紫外光显示，摄影。凋亡细胞形成明显的 DNA 梯度，而坏死细胞为不清晰的成片条带。活细胞 DNA 在胶顶部，是一个高分子量条带。

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