同时测定婴儿配方奶粉、成人营养品和蛋白粉中三聚氰胺和三聚氰酸的快速、灵敏的方法

2008年，三聚氰胺事件爆发，国家质检总局、卫生部等有关部门展开对乳制品全面清查，发现有多种婴幼儿奶粉、液态奶、酸奶含有三聚氰胺。随后，糖果、巧克力、咖啡奶精等涉乳食品行业也受到波及，食品行业发生重大的食品安全连锁反应。如何防止“三聚氰胺”卷土重来，我们共同关注着........

同时测定婴儿配方奶粉、成人营养品和蛋白粉中三聚氰胺和三聚氰酸的快速、灵敏的方法

摘要
由于婴儿配方奶粉生产商需要检测每批原料和成品是否存在三聚氰胺和三聚氰酸，因此有必要提供一种快速分析方法。本文所述的基于ACQUITY UPLC/MS/MS的方法由一家大型婴儿配方奶粉生产商的实验室开发；经证实，该方法非常灵敏且极其耐用，每天能分析100多个样本。

引言

近期牛奶和乳制品中含三聚氰胺事件已经导致中国数以千计的儿童患病，有部分患儿死亡。三聚氰胺（1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺；CAS# 108-78-1）常用于塑料、粘合剂、涂料和阻燃剂的生产。三聚氰酸（1,3,5-三嗪-2,4,6-三酮；CAS# 108-80-5）是三聚氰胺的一种结构类似物，多作为三聚氰胺的杂质而被发现。这些化合物的化学结构如图1所示。

三聚氰胺因其高含氮量而在中国某些地区被用以提高牛奶的表观蛋白含量。人们认为，这两种化合物相结合可引起肾毒性。迄今为止，很多监管机构已经提议将其在婴儿配方奶粉和成人食品中的限量分别定为1.0 ppm（μg/g）和2.5 ppm（μg/g）。美国FDA最近提议1.0 ppm可作为婴儿配方奶粉成品中三聚氰胺或三聚氰酸的容许量，但规定这两种化合物不能同时存在。其他监管机构（如台湾）将三聚氰胺的限量降低至0.05 ppm。用于检测面粉1和宠物食品2中的三聚氰胺和三聚氰酸的方法已经进行过介绍，Shia和Diehl描述了使用特殊的SPE对婴儿配方奶粉3中三聚氰胺和三聚氰酸进行萃取。然而，为确保婴儿配方奶粉的安全性并尽可能及时满足监管机构的检测要求，我们开发了一种用于同步测定三聚氰胺（MEL）和三聚氰酸（CYA）的高灵敏、更快速的新型检测方法，以实现高通量的产品筛查。该方法也适用于分析原料（如酪蛋白或乳清蛋白分离物），从而在用于婴儿配方奶粉生产前先对其进行核实。同位素内标用于校正样品制备过程中出现的微小偏差，并校正仪器对目标化合物响应中存在的基质效应。

试验
三聚氰胺和三聚氰酸的储备液分别溶解于100mL水中而配制出浓度为100μg/mL的溶液。混合标准溶液通过用流动相B将三聚氰胺和三聚氰酸储备液分别稀释为 2.5μg/mL和5.0μg/mL而制得。混合标准溶液每天现用现配。

三聚氰胺（13C3-15N3-三聚氰胺）和三聚氰酸（13C3-15N3-三聚氰酸）的同位素内标以0.1mg/mL水溶液的形式从剑桥同位素实验室购得。分析当天，稳定的同位素混合标准溶液通过将同位素内标溶液、标准溶液及2%的甲酸乙腈溶液按1:1:2的比例进行混合而制得

制备程序
■ 对于原料，称量1.0g样品放入一个20mL的玻璃瓶中
■ 添加10.0g水并混匀，使样品溶解-将溶解后的样品用作营养品样品
■ 称取1.0g产品（粉末或液体）或制备好的原料放入一个20mL的玻璃瓶中。
■ 加入等量的混合内标溶液
■ 加入5mL的甲酸水溶液（体积比2%）
■ 通过涡旋混合15秒左右或混合至所有固体均已溶解为止
■ 在第二个20mL的玻璃瓶中放入9mL含10mM醋酸铵的体积比为97/3的乙腈/水溶液
■ 将1 mL制备好的样品溶液转移至上述第二个玻璃瓶。
■ 混匀
■ 通过一个0.2μm的PTFE滤膜过滤样品并将滤液收集到进样瓶中

UPLC条件
液相色谱系统： 沃特世ACQUITY UPLC®
色谱柱： ACQUITY UPLC BEH HILIC
2.1 x 150，1.7μm
流动相： A：10 mM醋酸铵水溶液
B：溶于97/3乙腈／水的10 mM醋酸铵
弱洗针液： 甲醇
强洗针液： 水
进样针类型： PEEK
定量环： 10μL
进样类型： 满环进样