SDS-PAGE电泳常见问题及解决方案
问题 | 原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
①出现“微笑”形带（两边翘起中间凹下） | 由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中 | 待其充分凝固再作后续实验 |
②出现“皱眉”形带（两边向下中间鼓起） | 主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净 | 可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡 |
③带出现拖尾 | 样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起 | 加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度 |
④带出现纹理现象 | 主要是样品不溶性颗粒引起的 | 加样前离心；加适量样品促溶剂 |
⑤溴酚蓝不能起到指示作用，即遇到溴酚蓝已跑出板底，但蛋白质却还未跑下来的现象 | 主要与缓冲液和分离胶的浓度有关 | 更换正确pH的缓冲液；降低分离胶的浓度 |
⑥电泳的条带很粗 | 蛋白质样品未浓缩好 | 适当增加浓缩胶的长度；保证浓缩胶贮液的pH正确（6.7）；适当降低电压 |
⑦蛋白带过宽 | 加样过多或泄漏 | 适当减少上样量 |
⑧电泳电压很高而电流却很低 | 这种现象一般初学者易出现。比如电压50v以上，可电流却在5mA以下。主要是由于电泳槽没有正确装配，电流未形成通路。包括：a.内外槽装反；b.外槽液过少；c.电泳槽底部的绝缘体未去掉（比如倒胶用的橡胶皮） | 电泳槽正确装配即可 |
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