紫外分光光度法测定缬草中总缬草素类成分的含量

缬草（ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）为败酱科缬草属，多生于海拔８００～２ ５００ ｍ的山坡草地和林下，是一种多年生耐寒开花植物，分布于中国西南及东北地区，具有镇静催眠、神经保护、保护肾脏、调节循环系统、抗抑郁和抗肿瘤等药理活性［１］。缬草素类成分（ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ）是缬草的主要活性成分，具有镇静、催眠、抗焦虑、抗病毒、抗胃癌、解痉和舒张血管等药理作用［２－７］。缬草化学成分复杂，不同来源缬草有效成分组成和含量均有差异，目前缬草中缬草素类成分含量的测定方法有ｈｐｌｃ法和电位滴定法［８，９］，这类方法通常操作复杂，分析成本高。本试验采用紫外分光光度法测定缬草药材中总缬草素含量，旨在为建立缬草素快速分析方法提供参考。

１  材料与方法

１．１  材料

缬草采自贵州某地，粉碎后过６０目筛，待用。

缬草素标准品（四川维克奇生物科技公司）；分析纯甲醇和乙酸乙酯。

１．２  仪器

ｔ６新世纪紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）、ｋｑ５２００超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

１．３  方法

１．３．１  标准品制备  称取适量缬草素，用甲醇配制成１００ μｇ／ｍｌ的标准贮备液，分别取不同体积（０．２５～１．２５ ｍｌ）的缬草素标准贮备液于５ ｍｌ比色管中，用甲醇定容至刻度，摇匀，配制成系列浓度的标准工作溶液。

１．３．２  样品制备  准确称取缬草粉０．５ ｇ于具塞三角瓶中，加入乙酸乙酯５０ ｍｌ，浸泡２４ ｈ后，超声提取４０ ｍｉｎ，过滤，用乙酸乙酯定容至５０ ｍｌ，取滤液０．２ ｍｌ挥干，用甲醇溶解后定容于５ ｍｌ比色管中。

１．３．３  测定  以甲醇作空白试剂，在最大吸收波长处测定标准工作液的吸光度，绘制工作曲线，以相同条件测定样品液吸光度，计算样品中的含量。

２  结果与分析

２．１  测定波长的选择

在２００～４００ ｎｍ范围内分别扫描缬草素标准溶液及样品溶液，由图１可知缬草素标准溶液在２５６ ｎｍ处有最大吸收，故选择测定波长为２５６ ｎｍ。

２．２  工作曲线

按试验方法绘制缬草素的工作曲线，结果表明吸光度ａ与缬草素浓度ｃ在５～２５ μｇ／ｍｌ范围内具有良好的线性关系，其线性回归方程为ａ＝０．０３８ ３ ｃ＋０．００４ ２，ｒ＝０．９９９ ８。

２．３  精密度

取样品溶液按试验方法重复测定６次，结果吸光度的ｒｓｄ为０．０８％，表明仪器精密度良好。

２．４  稳定性

取样品溶液按试验方法在５ ｈ内每隔１ ｈ测定１次，结果吸光度的ｒｓｄ为１．９３％，表明样品溶液在５ ｈ内稳定性良好。

２．５  重复性

取同一样品溶液按试验方法平行测定６次，结果其总缬草素含量的ｒｓｄ为１．９６％，表明方法重现性良好。

２．６  回收率

为验证试验的准确性，在样品溶液中加入缬草素标准溶液进行回收试验并计算回收率，由表１可知加样回收率为９８．９４％～１０１．０７％，试验结果准确度高，符合分析要求。