噬菌体文库的铺平板和转移实验——基本方案
文库一旦包装就应该尽快进行扩增,它可以大大增加文库的拷贝数,但在扩增时由于克隆的生长速率不同,文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 通过系列等比稀释滴定噬菌体文库的滴度。
2. 重组噬菌体与铺平板的宿主菌混合于培养试管中(表一),于37 ℃温育20 min。
3. 按每个平板的噬菌体数决定筛选文库时将用到的平板数。
7. 用原珠笔在硝酸纤维滤膜上做好标记,标记面朝上。
10. 接着,滤膜转印面朝上,依次放在3张分别饱蘸下面3种液体的Whatman 3 MM 滤纸上,各1~2 min。
10. 将滤膜置于真空烤箱中80℃干烤90~120 min,或者置于42℃的恒温箱中过夜,若暂不做杂交实验,滤膜可用干燥的滤纸夹好,室温保存。 |