徐修礼，张建芳，樊新，孙怡群
（第四军医大学西京医院检验科，陕西 西安 710032）

摘要：目的 探讨革兰阴性杆菌感染患者和正常健康人群血浆内毒素水平及临床意义。方法 分别用定量动态比浊法和鲎试剂定性凝胶法检测革兰阴性菌感染患者和正常健康对照血浆内毒素含量。结果 正常对照组血浆内毒素定量3.30±1.73pg/ml，定性全部为阴性；革兰阴性菌感染组内毒素945±2244.43 pg/ml,定性阳性率为68.19%。经SPSS统计软件T-检验分析，对照组与革兰阴性菌感染组内毒素平均值差异显著（t=2.608,P=0.025），相关性分析表明定量动态比浊法和鲎试剂定性凝胶法在0.01水平相关。结论 检测血浆内毒素含量有助于早期判断感染的细菌种类及是否存在内毒素血症，有利于临床合理应用抗菌药物和及时对症处理。
关键词：内毒素；革兰阴性杆菌；内毒素血症；检测方法
中图分类号：378.2    文献标识码：A
Clinical significance of plasma endotoxin detecting of patient with gram negative bacillus infection

XU Xiu-li,ZHANG Jian-fang,FAN Xin,SUN Yi-qun
(Clinical Lab. of Xijing Hospital,the Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,China)
Abstract:OBJECTIVE To study the Clinical significance of plasma endotoxin detecting of patient with gram negative bacillus infection. METHODS  Plasma endotoxin of patient and healthy people were detected by turbidimetric assay and gel-clot assay with limulus reagents. RESULTS  Mean plasma entoxin of healthy people was 3.30±1.73pg/ml and gel-clot assay were all negative.In gram negative bacillus infection group, the result was 945±2244.43 pg/ml and positive rate of gel-clot assay was 68.19%.T-test analysis indicates the mean plasma entoxin of two groups have notable difference(t=2.608,P=0.025). Relativity analysis indicates there was correlation between turbidimetric assay and gel-clot assay on 0.01 level. CONCULION Plasma endotoxin detecting is helping to estimate what kind of bacteria infected and endotoxemia. It is also significant to select antibacterial reagents nationally and handle syndrome on time.

Key words: Endotoxin；Gram negative bacillus；Endotoxemia；Detecting method
 
内毒素是革兰阴性细菌细胞壁结构中的类脂多糖体（脂多糖），此种脂多糖经细菌胞壁合成后被转运到细胞表面构成胞壁外膜的组成成分，在细菌死亡溶溃后从细胞结构中释放出来。内毒素及其活性中心（类脂A）对宿主具有 多种毒害作用，例如内毒素使实验动物产生发热、影响白细胞、施瓦兹曼（Shwartzman）反应、激活补体和凝血系统及降低血压等毒性作用，从而造成组织损伤并与许多临床病象有密切关系。另一方面它又可发挥诸多对机体有益的生物学活性，适量的内毒素可增强机体非特异性免疫的作用，能够抗感染、抗辐射，并能增强网状内皮细胞的活力，并具有使肿瘤坏死消退的活性。
近年来国内外报道革兰阴性菌感染有逐年增加的趋势，故快速诊断革兰阴性细菌所致的败血症和内毒素血症已被临床越来越重视。但现有的细菌学检查需时间较长，且由于抗菌药物的广泛应用使培养阳性率降低。现在更多的报道已阐明内毒素血症可存在于无菌血症的各种情况，如网状内皮系统功能障碍；肠道粘膜损伤；局部阴性细菌感染；污染大量内毒素的注射药品、输液及输血等。以鲎试验定量比浊法来检测内毒素，能对内毒素血症、革兰阴性细菌败血症和革兰阴性细菌感染的病人做出早期诊断和对症治疗，以助于病人的早期康复。 

1.       材料和方法
1.1病例选择  我院住院的肺部革兰阴性菌感染患者22例，年龄18-87岁，革兰阴性菌菌血症10例，年龄2-71岁，均经培养证实为革兰阴性菌感染；正常健康对照30例，来自我院健康查体者。
1.2材料  MB-80微生物快速动态检测系统、T01智能恒温仪、冰浴槽以及EKT-5M Set动态内毒素检测试剂盒均由北京金山川科技发展公司提供。内毒素定性鲎试剂购自福州新北生化工业有限公司。
1.3方法 
1.3.1血浆制备  用含有少许无菌抗凝剂(肝素钠)的无热原玻璃注射器或一次性采血管采取静脉血1-2ml,缓慢放入无热原离心管中,用无热原铝箔封闭管口以防污染,然后进行3000rpm离心60s分离得富血小板血浆(简称PRP),取出后立即放入冰水浴中直到下一步,若暂时不用,可在-30℃冰箱中保存1个月。取上述富血小板血浆0.05ml，加入装有0.45ml样品处理液中，混匀后70℃保温10min，取出后立刻放入冰水浴中，即为待测血浆样品。
1.3.2测定分析  取待测血浆0.2ml直接加入反应主剂中，溶解后使用微量加样器转移至10×75mm标准玻璃反应管中（不要产生气泡），插入MB-80微生物快速动态检测系统中进行反应，反应结束后由标准曲线自动计算出待测血浆中内毒素含量。注意避免微生物及细菌污染。所有标本同时用鲎试验定性凝胶法测内毒素作为对照。
2.结果
正常对照组血浆内毒素定量3.30±1.73pg/ml，定性全部为阴性；革兰阴性菌感染组内毒素945±2244.43 pg/ml，其中肺部感染者内毒素定量160.41±222.78 pg/ml，定性法7例为阴性，15例阳性，阳性率68.19%；菌血症患者内毒素定量2671.7±3523.91 pg/ml，定性全部为强阳性。经SPSS统计软件 T-检验分析，对照组与革兰阴性菌感染组内毒素平均值差异显著（t=2.608,P=0.025），相关性分析表明仪器定量法与凝胶定性法在0.01水平相关。