三色书虱外部形态的扫描电镜观察
实验概要
本实验运用扫描电镜对三色书虱的外部形态进行了观察,旨在为该虫的正确鉴定提供基础资料。
主要试剂
饿酸[Polysciences Inc.]
戊二醛[国药集团化学试剂有限公司]
叔丁醇[中国医药集团上海化学试剂公司]
单宁酸[天津市大贸化学试剂厂]
乙腈[天津市大贸化学试剂厂]
主要设备
光学显微镜[OLYMPUS]
S-3000N电子显微镜[HITACHI]
E-1010/E离子溅射仪[HITACHI]
实验材料
三色书虱采自野外,在实验室内建立种群。
实验步骤
1. 玻片制作
将用75%-80%酒精浸泡的书虱标本用70%的酒精洗涤2-3次,用加拿大胶封固,在45℃烘箱中烘15天左右,干燥后用指甲油加封盖玻片的四周,第一次干燥后,再二次加封,防止固定胶内的水气透出以免干燥。所有更换液体的操作在一个小玻皿内进行,用吸管将血内液体吸出,再用另一吸管吸取其他液体放入皿内,以免损坏标本。
2. 电镜前处理
按以下步骤依次进行:
(1) 用1.5 mL的离心管取三色书虱50头或更多,因为在处理过程中会有样品损失;
(2) 将2.5%的戊二醛约l mL加入离心管中并置于4℃冰箱里固定2h或过夜;
(3)用一次性注射器吸出离心管中的戊二醛,再加入约lmL的pH值为7.8的磷酸缓冲液并适当震荡清洗样品,重复3次,每次15-30 min;
(4) 用注射器吸出磷酸缓冲液,加入1%的饿酸约500µL固定1h;
(5) 用双蒸水清洗4次,每次15-30 min;
(6) 用2%的单宁酸约500µL浸泡2h或过夜(单宁酸能与饿酸结合,增加电子反差,使更多饿酸分子和样品分子结合);
(7) 用双蒸水清洗4次,每次15-30 min;
(8) 再加入1%的饿酸约500µL固定1h后,用双蒸水清洗4次,每次15-30 min;
(9) 依次经过30%,50%,60%,70%,80%,90%,100%酒精脱水,每次15 min;
(10) 采用叔丁醇一乙腈干燥法进行干燥:50%叔丁醇处理10 mim,70%叔丁醇处理10 min,100%叔丁醇处理10 min,叔丁醇一乙睛(2:1)处理10 min,叔丁醇一乙睛(1:1)处理10 min,100%乙睛处理10 min;
(1l ) 用E-1010/E离子溅射仪进行离子镀膜。
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焦点事件
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