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组织芯片制备仪

2020.9.01

  组织芯片技术是以形态学为基础的分子生物学新技术,应用范围涵盖了整个生命科学中各个基础研究、临床研究、应用研究以及药物开发的相关领域。凭借其省时、高效、误差小等优点,自诞生以来就获得了生命科学从业人员的热切关注。

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  那么组织芯片到底是如何制备出来的呢?

  简短截说,组织芯片制备就是通过组织芯片阵列仪细针打孔的方法,从众多的组织蜡块(称为供体蜡块,donor)中采集到数十至上百的圆柱形小组织(组织芯,tissue core),并将其整齐排列另一空白蜡块(称为受体蜡块,recipient)中,而制成组织阵列块。然后对组织组织阵列块进行切片,再将切片捞片到载玻片上制成组织芯片。详细制备步骤如下:

  芯片微阵列设计

  在构建组织芯片之前,应该预先计划检测多少样本,然后相应地进行设计。对大多数研究来说,在一个常规的载玻片上放置60~100个样本已经足够了。当样本超过100例时,上样、切片、染色及研究各个步骤都要求相当熟练,并且由于样本排列过于紧密,有可能导致芯片制作和研究失败。因此在计划检测数百个到上千标本时可考虑多做几个组织芯片。

  收集病理及相关蜡块

  挑选出具有随访资料的不同发展阶段的肿瘤组织蜡块,根据HE切片对石蜡标本中有代表性的点进行标记,包括典型的肿瘤和相应的正常组织,以构建肿瘤组织芯片。

  TMA受体蜡块制备

  取蜡块制成长36mm*宽26mm*高17mm的空白蜡块,在该蜡块20mm×16mm范围内设计10×8点组织陈列。组织四周预留0.5cm-0.7cm空间,用组织仪打孔制成TMA蜡块。

  受体蜡块打孔

  在组织芯片制作机上用细针对受体蜡块打孔,孔径以1~2mm比较适宜。同样在供体蜡块上标记的相应部位打孔采集组织芯,孔径同样为1~2mm。将组织芯转移到受体模块的孔中,每个组织芯之间的间距以0.2mm为佳。

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  为了防止在打点、切片、染色或免疫组化过程中出现漏点、滑片及掉片现象,每个样本可以上样1-2个点。

  TMA芯片蜡块融合

  将构建好的TMA芯片蜡块放在相宜的塑料盒子内,并严密固定防止移位。放入50℃温箱中约10分钟,在蜡将要完全溶解前,取出于室温下冷却,使受体模块的蜡与新插入的小圆柱状组织溶为一体,取下蜡块,于4℃冰箱中保存备用。

  切片

  切片前,蜡块需在4℃中预冷4h左右,然后夹在切片机上进行修正,等修到全部组织完整为止。

  用-20℃预冷冰袋贴在蜡块上5-10min左右,快速连续切片30-50张左右,再用冰袋冷冻组织块,或直接在冰冻切片机内进行,直至将组织切完为止。

  将3 μm连续切片分别漂在凉水中,让其自然展开,按顺序将切片转移至45℃的温水中展片2min左右,将其贴在防脱载玻片上晾干,60℃中烤片2h左右, -20℃保存备用。


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