琼脂糖凝胶电泳原理
琼脂糖凝胶电泳原理
琼脂糖凝胶电泳，是以琼脂糖为介质，对不同大小的DNA 或 RNA 实现分离的一种电泳方法。琼脂糖是一种多糖，具有亲水性，但是不带电荷。
使得 DNA 在碱性条件下使其带负电荷（pH8.0 的缓冲液），在电流作用下，以琼脂糖凝胶为介质，由负极向正极移动，根据不同的 DNA 分子片段的大小和形状不同，在电场中泳动的速率也不相同，同时在样品中加入染料（如EB或花青素类染料）能够和DNA 分子间形成络合物，经过紫外照射，可以看到 DNA 的位置（比对 marker 可知分子量大小），从而达到分离、鉴定的目的。
琼脂糖凝胶电泳步骤
1. 用蒸馏水将制胶工具洗干净，准备好制胶平板，用琼脂将模具边缘封闭，架好梳子；
2. 根据要分离的样品（DNA）大小配制合适浓度的琼脂糖凝胶。准确的称取一定量的琼脂糖干粉，加入到合适体积的锥形瓶中，加入一定量的电泳缓冲液（30ml 左右TAE）；放入到微波炉内加热融化，冷却片刻（不烫手即可）；
3.融化后的琼脂溶液摇晃混匀，倒入电泳槽中，等其凝固；
4. 室温下凝固30-40min左右，小心的拔出梳子，取出凝固好的凝胶放入电泳槽内，准备上样；
5. 在电泳槽中倒入电泳缓冲液（TAE）；没过胶面 1mm左右，去除胶孔内的气泡；
6. 上样，5ulDNA 样品加入 1ul上样缓冲液（loading buffer）和 1ul的染料，用抢混匀后加入到凝胶孔内； 7. 上样结束，接通电源，红色正极，黑色负极，DNA 样品有负极往正极运动，加样孔侧为负，，40-50v 电
压，电压 30敏左右即可（<40min）；
8. 电压结束，关闭电源，凝胶成像仪上观察电压位置并比对marker 判断大小。
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技术原理
