鸡血藤中黄酮成分的高速逆流色谱分离及抗肿瘤活性研究
摘 要：目的 采用高速逆流色谱（HSCCC）技术分离纯化鸡血藤中的黄酮类抗肿瘤活性成分。方法 运用活性跟踪分离思路，优化制备型HSCCC 分离条件，快速分离鸡血藤醋酸乙酯萃取物中的黄酮类单体化合物；根据理化性质和波谱方法（ESI-MS、UV、NMR 等）鉴定化合物结构；采用MTT 方法并结合细胞形态学观察评价化合物对人肺癌细胞A549 的抗肿瘤活性。结果 利用正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水四元两相溶剂体系，通过HSCCC 法从鸡血藤醋酸乙酯萃取物中分离得到2 个黄酮类成分，鉴定为甘草素（CS1）和刺芒柄花素（CS2），HPLC 峰面积归一化法分析二者的质量分数分别为93.6%和94.3%。MTT 法抗肿瘤活性测定发现CS1 对A549 细胞显示增殖抑制活性，当质量浓度为200 μg/mL 时对A549 细胞的增殖抑制率为49.9%。结论 可以采用HSCCC 技术分离纯化鸡血藤提取物中的黄酮类抗肿瘤活性成分，该方法快速、简便、经济，为鸡血藤活性成分研究提供了技术依据。
鸡血藤Spatholobus suberectus Dunn 是我国一种传统中药材，入药历史悠久。《中国药典》2010年版记载，鸡血藤为豆科植物密花豆的干燥藤茎，秋冬二季采收，除去枝叶，切片，晒干即为鸡血藤。药理研究发现鸡血藤具有激活造血系统、补血活血、舒经活络的功效，在民间用于血液系统、恶性肿瘤及风湿性关节炎等疾病的治疗。目前，鸡血藤的研究仅见有关其提取物药理活性和单纯化学成分的研究报道[1-5]，研究发现鸡血藤中黄酮类活性成分较多，这些成分通常采用硅胶柱色谱分离，速度较慢，重现效果不理想[6]。高速逆流色谱（high speed countercurrentchromatography，HSCCC）作为一种不需要固相载体的液-液分配色谱，现已在天然产物分离纯化领域得到广泛应用，与传统柱色谱方法相比，具有分离速度快、样品吸附低、分离重现性好等优点[7-11]。本实验旨在利用HSCCC 技术活性跟踪分离纯化鸡血藤醋酸乙酯提取物中的黄酮类抗肿瘤活性成分，建立活性单体化合物的分离条件和分析方法，并采用MTT 方法评价单体化合物的抗肿瘤活性。
