病毒 DNA 的提取实验——全血细胞中病毒 DNA 的提取
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 在 750µl 全血中加入等量裂解缓冲液 A,混匀, 12000 r/min 离心 30 s, 弃上清液。 2. 用 1.5mL 裂解缓冲液 A 悬起沉淀,再重复离心 1次,弃上清液。 3. 用 117µL 裂解缓冲液 B 溶解沉淀, 70℃作用 5 min, 待冷却至 55℃时加入3µL 蛋白酶 K, 并保温1h 消化细胞, 95℃ 10 min 灭活蛋白酶 K 。 4. 加入 2 mol/L 的 KCL 溶液 30µL, 冰溶 5 min 。 5. 12000 r/min 离心 5 min, 弃上清液做 DNA 模板。即获得病毒DNA。 展开 |
注意事项 | |
其他 | 1. 裂解缓冲液 A 由 320 mmol/L蔗糖、 10 mmol/L Tris-HCl(pH 7.6) 、 5mmol/L MgCl2和1% Triton-X-100 组成。 2. 裂解缓冲液 B由10 mmol/L Tris-HCl(pH 7.6) 、 1% SDS 组成。 3. 蛋白酶 K(25 mg/ml) ,ddH2O配制,-20℃保存。 |
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