冰冻切片
实验概要
冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
实验步骤
1. 冷冻切片的制作方法
1) 将恒冷箱冷冻切片机的速冻头和箱内温度调整到适宜的切温度，一般情况下为-18～-25℃。
2) 在标本冷冻托上涂布一层冷冻包埋剂——OCT，然后将取材后新鲜标本安放在标本冷冻托上并用OCT覆盖标本。
3) 标本冷冻完成后将标本托固定在切片机的机头上，调整机头位置使其恰好位于切片刀的后方。
4) 使用粗切削方式进行标本的粗切削至暴露标本的最大平面，使用自动推进方式连续切削2～3刀后用毛笔清除机头、标本托及切片刀上的组织碎屑。
5) 调整并确认切片的厚度，一般为4～8 um，染脂肪和神经组织应控制在12~25 um。
6) 放下防卷板使防卷板的位置恰好与切片刀的刀刃完全平行并略突出于刀刃。
7) 以自动推进的方式进行切片，良好的切片将在防卷板的下方形成一张完整平整的薄片，如切片略有弯曲可用小毛笔轻轻展平切片。
8) 打开防卷板，用载玻片平稳地轻压切片使其平整地吸附到载玻片上。
2. 冷冻切片的染色
切好的冷冻切片立即投入丙酮中进行固定，一般固定1～2 min即可进行染色，用于免疫组化染色的冷冻切片应在切片略干时即刻投入冷甲醇中固定10~15 rmin，然后进行相应的组织化学染色程序。
冷冻切片的HE染色程序：
1) 切片在丙酮中固定1～2 min；
2) 水洗5s；
3) 使用新鲜的Harris苏木精染液染细胞核2min；
4) 水洗5s；
5) 在0.5%的盐酸乙醇液中分化1～3s；
6) 水洗5s；
7) 在0.5%～1%的伊红染液中染细胞质20~30s；
8) 水洗5s；
9) 在95%乙醇I、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇I、100%乙醇Ⅱ、中逐级脱水各3～5s；
10) 甲苯I、二甲苯Ⅱ透明各5s；
11) 干组织周围的二甲苯，在二甲苯尚未干燥前滴加光学树脂胶封片。
方法评论
