原代肿瘤细胞的选择性培养:汇合饲养层肿瘤细胞筛选
实验方法原理 |
在指数生长中期,用丝裂霉素C处理饲养层细胞,将细胞培养形成汇合的单层。通过胶原蛋白酶消化从活检标本分离肿瘤细胞,或者用胰蛋白酶消化从原代培养物获得肿瘤细胞,然后将肿瘤细胞接种到汇合的单层上(图24.1)。上皮性肿瘤细胞可以在3周至3个月内形成克隆。纤维肉瘤和神经胶质瘤并不总是形成克隆,而可侵入饲养层,并逐渐过渡生长。
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实验材料 | 3T3细胞 STO细胞 10T1 2 细胞 |
试剂、试剂盒 | 生长培养液 胶原蛋白酶 胰蛋白酶 |
仪器、耗材 | 手术刀 Petri 培养皿 |
实验步骤 |
一、材料 首次使用饲养层细胞时,最好作丝裂霉素 C 的剂量反应曲线,证实这个剂量能使饲养层细胞存活 2~3 周,但使细胞最多进行两个倍增后不再继续增殖。在这种情况下,按如下步骤进行:
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