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分子生物学实验室的常规仪器设备及有关操作(二)

2020.7.27

(六)超净工作台:内有紫外灯、照明灯、还应有酒精灯火焰、75%乙醇等灭菌的设备,是一种提供局部洁净度的设备。其原理是鼓风机驱动空气,经过低、中效的过滤器后,通过工作台面,使实验操作区域成为无菌的环境。超净台按气流方向的不同大致有几种类型:
 ①侧流式:净化后气流,从左侧或右侧通过工作台面,流向对侧,或者从上往下或从下往上流向对侧,他们都能形成气流屏障而保障台面无菌。
 缺点:在净化气流和外边气体交界处,可因气体的流向而出现负压,使少量的未净化气体混入,而造成污染。
 ②外流式:气流是面向操作人员的方向流动,从而保证外面气体不能混入。
 缺点:在进行有害物质实验时,对操作人员不利,但可采用有机玻璃把上半部分遮挡起来,使气流往下方流出。

(七)电泳系统:电泳技术是检测、鉴定各种生物大分子的纯度、含量及描述它们的特征,甚至还是分离、纯化、回收和浓缩样品的工具之一。核酸和蛋白质等都带有电荷,当它们被置于电场中时,能够移动。
 电泳装置由两部分组成:电源装置和电泳槽装置。
 ① 电泳装置:电源需经稳流通过稳压器,既能提供稳定的直流电,又能输出稳定的电压。可用于三种:
 常度稳压电泳仪:输出电压0-500v 0-15mA
 中度稳压电泳仪:输出电压400-1000v
 高度稳压电泳仪:输出电压1000以上的电源装置。
 ② 电泳槽装置:分两种
 水平式电泳槽:一般分为微型电泳槽和大号水平式电泳槽
 垂直式电泳槽:分垂直平板电泳槽和圆柱形电泳槽装置。

(八)PCR仪:Polymerase Chain
 Reaction仪,也称DNA热循环仪,基因扩增,它是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧,从而酶促合成拷贝数百万倍的靶序列DNA片段,它的每一循环包括在三种不同温度进行的DNA变性,引物复性,DNA聚合酶催化的延伸反应三个过程。

(九)凝胶成像分析系统:
 对电泳后含溴乙锭(EB)核酸样品的观察分析。

 (十)干燥设备: 3
 1. 真空加热干燥箱:核酸在硝酸纤维素膜和尼龙膜上固定,用于杂交实验。
 2. 电泳凝胶干燥箱:电泳后的凝胶进行脱水干燥的仪器,一般可将凝胶干燥到一些玻璃纸上,干燥后的凝胶易于保存。
 3. 液氮冷冻干燥:适用于活性蛋白质样品的干燥与结晶。
 4. 真空泵:许多实验都需要抽真空。如:乙醇沉淀后核酸样品的干燥,电泳凝胶的干燥等。

 (十一) 其他
 1. 微波炉:便于一些溶液的快速加热和定温加热,电泳琼脂糖凝胶配制、溶化等。
 2. 制冰机:用于制造大多数核酸、蛋白质的实验操作所需的低温环境,以减少核酸酶或蛋白质酶的水解。
 3. 层析装置:(色谱分离)是一种分离多组分混合物的有效物理方法。
 真空印记系统,DNA合成/测序仪:这些都是对核酸进行深入研究的必备仪器。
 4. 磁力搅拌器:多角度旋转混匀器、快速振荡混合器:用于混合仪器。
 5. 组织匀浆器:超声组织及细胞破碎器,用其进行样品的分离提纯实验。
 6. 通风橱:很多溶剂能逸出毒气,必备柜 ,放射性试验还要有有机玻璃屏蔽。
 7. 玻璃蒸馏器、电热加帽、变压器:用于酚等有机溶剂的蒸馏。
 8. Tip头、Eppendorf管:
 微管移液器tip头(吸液尖)、Eppendorf管(微量离心管)可洗涤,硅化消毒后反复使用。对一些要求严格的实验,如RNA的提取、保存等操作,应使用新的消毒tip头与Eppendorf管。另外还应备有常用规格的离心管(1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等)及96孔、24孔、12孔、6孔的细胞培养塑料平板等。
 9. 小型设备、用具:
 定时器、滤膜、保鲜膜、防护眼镜鸭嘴镊、常规的玻璃或塑料器皿(包括平皿、试管、烧杯、量瓶、试剂分液漏斗、避光保存的试剂应使用棕色试剂瓶,如饱和酚、巯基乙醇等)、记号笔、各种手套PE、乳胶、家用、防酸的等)

 二、本期实验所用主要仪器、 设备的功能及操作
 1. 酚的重蒸馏装置:空气冷凝式玻璃蒸馏器。
 一般酚是无色透明的结晶,如呈粉色或黄色,表明其中含有酚的氧化产物,如醌、二酸等,变色的酚不能用于实验,因其中的酚氧化物可破坏核酸的磷酸二酯键,并引起DNA链的交联。使用前必须在160℃-180℃重蒸馏以去除能引起RNA和DNA断裂和交联的污染杂质,从而得到纯净的酚。
 2. 磁力搅拌器:81-2型恒温磁力搅拌器
 将导电温度表用导线与二芯插头连接,插入后面的温度表孔内,当温度上升到预先调整好的度数时即自动停止加热(控温搅拌)。主要用于物质的快速搅拌、溶解和混匀。如配制试剂,制备酚的水饱和液等。
 3.
 蒸馏水器:1810B自动双重纯水蒸馏器,石英管加热式,本器的一次及二次蒸馏均有保护装置,使用安全可靠,热继电器当冷却水突然中断或缺水的情况下,即自动切断电源。干簧继电器控制二次蒸馏瓶内的水位,其高度应以在水位降低时能自动切断电源为准,从而达到自动控制水位的目的。
 该仪器主要用于制备双蒸水和三蒸水。
 4. 离心机:TGL-16G台式高速离心机,最大转速20000rpm,主要用于核酸提取时蛋白质的沉淀和有机相与水相的分层,PCR检测的瞬时离心。
 5. 微量取液器:主要用于精确量取微量液体体积和核酸水相的转移。
 6. 匀浆器:5ml、10ml玻璃匀浆器。
 主用于组织细胞的破碎。
 7. 凝胶成像分析系统
 主用于核酸样品琼脂糖凝胶和PCR电泳结果的紫外观察和照像。
 8. PCR仪:PTC-200基因扩增仪
 体外扩增核酸的仪器
 9. 蒸汽消毒锅:用于实验用试剂、器皿、用具等的灭菌清毒
 有电加热式、电炉加热式两种。
 10. 超净台:JJT-1300型洁净工作台,侧流式。
 原理:吸进气经过初、中级过滤皿(无纺布滤过)后,再通过风机经高级过滤器(超细玻璃纤维滤纸制成)而形成洁净空气。主要是在局部空气造成洁净空气环境,以使工作区域中的悬浮粒子及微生物控制在最低限度内。
 本台操作压为垂直层流压,因此出风面与操作位置不应放置多余的物品,以免妨碍气流的正常流动,影响洁净度,台面板上的孔作为通风孔,使用时避免有液体或其他物品漏入空中,以免影响内部构件。风速可调。
 使用:75%乙醇消毒2-3次,摆放好实验用品。插上电源,紫外消毒30分钟,启动风机5m后关灯,关灯后10分钟打开照明灯,即可使用。
 11. 电泳系统:
 ①电泳仪:HV-3000型高度三恒多用电泳仪(恒压、恒流、恒功率)
 ②电泳槽:水平式两种。
 12.微波炉:主要用于琼脂糖的快速溶解。

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