对于禽流感检测样本的获得和前处理推荐的方法

对于禽流感检测样本的获得和前处理推荐的方法

对于禽流感检测样本的获得和前处理，可以参照国家标准“高致病性禽流感诊断技术（GB/T 18936-2003）”推荐的方法进行，具体为：

【病料的采集】死禽采集气管、脾、肺、肝、肾和脑等组织样品，进行分别处理或者同时处理；活禽病料应包括气管或泄殖腔拭子，尤其以采集气管拭子更好；小珍禽用拭子取样易造成损伤，可采集新鲜新鲜粪便。

【病料的保存】病料应放在含有抗菌素的pH值7.0～7.4的等渗磷酸盐缓冲液（PBS）内（无PBS可用25％～50％的甘油盐水）。抗生素的选择视当地情况而定，组织和气管拭子悬液中应含有青霉素（2000IU/ml）、链霉素（2mg/ml）、庆大霉素（50µg/ml）和制霉菌素（1000IU/ml），但粪便和泄殖腔拭子所有的抗生素浓度应提高5倍，加入抗生素后pH值应调至7.0～7.4。在室温放置1h～2h后样品应尽快处理，没有条件的可在4℃存放几天，也可于低温条件下保存（-70℃贮存）。

【病料的处理】将棉拭子充分捻动、拧干后弃去拭子；粪便、研碎的组织用含抗生素的pH值7.0～7.4的等渗PBS溶液配成10％～20％（g/ml）的悬液，样品液经1000r/min离心10min，取上清液作为实验材料。

【病料保存样本保存和运送的一般原则是什么】

一般性原则：采集和运输：

标本采集用材料，如棉签和拭子都应一次性使用，所使用的抗腐剂和抗凝剂不应对样本和扩增反应有降解或抑制作用。

对于RNA样本，要特别注意混入操作人员的毛发、表皮细胞和痰液。

对于DNA样本的运送：可在室温下运送，建议在8小时内完成，对RNA，10分钟内的运输可在室温进行，超过此时间，必须加冰运输，既便低温，一般亦不得超过4小时。

标本的保存：对DNA：2℃－8℃可稳定放置3天，RNA一律－20℃保存。

主要的扩增反应抑制物质：血样中用于抗凝的肝素，可以枸橼酸钠或EDTA-K3替代；血红蛋白、乳铁蛋白

【口腔棉签拭子和泻殖腔样品如何保存】

口腔棉签拭子和泻殖腔样本一般不单独保存，在取样后，应尽快将其放入含PBS缓冲液（有时要加入抗生素）的离心管充分捻动，拧干后立即进行处理和使用，不立即使用时，推荐-70℃低温保存。如果暂时不处理，也可将拭子留于离心管中低温保存。