依赖核酸序列的扩增技术的定义和原理

1.概述：依赖核酸序列的扩增(Nucleic acid sequence-based amplification，NASBA)，又称自主序列复制系统(self- sustainedsequence replication，3SR)或再生长序列复制技术。1990年Guatelli等首先报道了这一技术.NASBA 主要用于RNA的扩增、检测及测序.该反应有赖于AMV 逆转录酶，T7RNA多聚酶和核酸酶H(RNaseH)共同协作而完成。NASBA反应体系中除含有上述三种酶外，还含有核糖核苷，两种特殊的引物和缓冲液。引物I 3‘末端与靶序列互补，5’端含T7RNA多聚酶的启动子，这一引物是用于合成cDNA的.引物Ⅱ的碱基序列与cDNA的5‘ 未端互补。

2.原理：在NASBA反应时，首先引物Ⅰ与RNA模板复性( 结合)，AMV逆转录酶催化合成cDNA，RNaseH水解cDNA上的RNA，形成一条单链的DNA;引物Ⅱ随即与此cDNA的5'未端结合，逆转录酶在此DNA模板的指导下合成第二条DNA链.这样形成的DNA双链含有T7RNA多聚酶的启动子.该酶即以此DNA为模板，转录出与样品RNA序列相同的RNA链，而且每条DNA模板在该酶的作用下可合成约100个拷贝的RNA.每条新的RNA又可作为逆录酶的模板合成cDNA.如此反复进行，将获得更多的RNA和cDNA.