人CD34+细胞分选
实验概要
人CD34 细胞分选
主要试剂
HSCs培养液、造血干细胞分选缓冲液、 CD34 磁珠分选试剂盒
主要设备
磁珠分选系统，离心机，超净台，体视镜，倒置镜，30μm细胞筛，细胞计数仪
实验步骤
（1）用DPBS将30μm细胞筛润湿，过滤分离得到的单个核细胞，去除细胞团块。
（2）用细胞计数仪进行细胞计数，根据细胞数来确定使用的柱子数量。
（3）过滤后的单个核细胞2000 r/min离心4min。
（4）弃上清，用300 μl的造血干细胞分选缓冲液重悬细胞。
（5）每1×108细胞加100 μl的FcR阻断剂和100 μl的CD34磁珠。
（6）混匀后在4～8°C冰箱中孵育30 min。
（7）每1×108细胞加5～10 mL造血干细胞分选缓冲液洗涤细胞，室温2000 r/min离心10 min。
（8）弃上清，把1×108细胞重悬在500 μl缓冲液中。
（9）细胞分选
①在分选器上安装分选柱。
② 用造血干细胞分选缓冲液润洗分选柱。
③ 把细胞悬液加入到分选柱中。
④ 收集流过分选柱未被标记的细胞：用1ml的造血干细胞分选缓冲液清洗分选柱3次。收集流过分选柱未被标记的细胞。
⑤ 从分选器上取下分选柱将其放在适当的收集管上。
⑥ 取适1ml当量的造血干细胞分选缓冲液加入分选柱中，马上用均力把活塞推入分选柱，把目的细胞推出。
⑦ 为了提高纯度，可以二次过柱分选，重复①～⑥步。
（10）根据实验需要上流式细胞仪检测分选纯度或者进一步进行细胞培养等实验。
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