酸性磷酸酶的显示实验
实验方法原理 Gomori硝酸铅改良法是根据:以磷酸酯为底物,其被磷酸酶水解后释放出磷酸基,在pH5左右和铅盐结合成磷酸铅盐,但磷酸铅无色,须经硫化铵作用使其变成棕黄色至棕黑色的硫化铅沉淀。
实验材料 427细胞
试剂、试剂盒 丙酮乙醇Gomori硝酸铅作用液甲基绿硫化铵
仪器、耗材 温箱冰箱显微镜乳头吸管
实验步骤
1. 将培养的427细胞在冷丙酮或95%乙醇中固定15~30分钟。
2. 待片干燥。
3. 移入已预热(37℃)的作用液中孵育2小时。
4. 蒸馏水洗。
5. 移入2%醋酸酸化1分钟,蒸馏水快速漂洗。
6. 移入1%硫化铵1分钟,自来水漂洗数次。
7. 必要时用甲基绿复染。
8. 酸性磷酸酶活性结构呈棕黄色至棕黑色。对照:在处理过程中,在作用液中不加入甘油磷酸钠而加入蒸馏水,则呈阴性。
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