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pcr反应体系包括哪几个组分

2022.11.14

PCR反应体系由寡核苷酸(引物)、4 种dNTP、Taq DNA聚合酶、靶序列DNA和PCR反应缓冲液体系组成。

设计PCR引物时的一般原则:

(1)引物长度一般15~ 30碱基,过短则特异性低; 过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增。

(2) 避免内部二级结构,避免序列内有较长的回文结构,使引物自身不能形成发夹结构。

(3) G/C 和A/T 碱基均匀分布,G/C 含量在45%~ 55% 之间,引物碱基序列尽可能选择碱基随机分布,避免嘌呤、嘧啶的连续排列。

(4) 要避免两个引物间特别是3' 末端DNA 序列互补以及同一引物自身3' 末端的序列互补,使它们不能形成引物二聚体或发卡结构。

(5) 引物3' 端碱基一般应与模板严格配对,并且3' 端为G、C 或T 时引发效率较高。


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