动物RNA提取实验——Trizol试剂提取法
| 实验方法原理 | Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液，其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性，随后加入氯仿，酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中，RNA则分布在上层的水相中，最后用异丙醇沉淀水相中的RNA，并用70%乙醇洗涤沉淀，这样就可以得到比较纯净的总RNA。 |
|---|---|
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 实验步骤 | 一、 先在研钵中加入液氮，再将组织剪成小块在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取50-100 mg组织粉末加入已盛有1 ml的Trizol液的EP管中（注意组织粉末总体积不能超过所用Trizol体积的10%），充分混合均匀。
二、 室温放置5 min，然后加入200 μl的氯仿，盖紧EP管并剧烈摇荡15秒钟。
三、12 000 rpm离心10 min，取上层水相于一新的EP管中（千万不要将中间的沉淀层和下层液混入，否则重新离心分离），加入500 ul 异丙醇，温和颠倒混匀。室温放置10 min，12 000 rpm离心10 min。
四、 小心地弃去上清液，加入1 ml的75%乙醇，涡旋混匀，4℃下12 000 rpm离心5 min。重复操作一次。
五、 弃去上清液（尽量将残余液体除去），室温或真空干燥5-10 min（注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度）。用30 ul DEPC处理过的水将RNA溶解，必要时可55℃-60℃水浴 10 min。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。 |
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