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光学显微镜检测肿瘤细胞形态实验——HE染色法

2019.4.03

实验方法原理	HE染色也称苏木精-伊红染色，它是常规染色。苏木精是一种天然染料，它本身并不能染色，在经氧化后变成苏木红才是真正的染料，苏木对细胞核的亲和力并不强，而在媒染剂的帮助下才能较好显示细胞核，此时细胞核呈红色，只有在碱性环境中，苏木才变成蓝色。伊红Y是人工全盛染料，它可能是通过渗透或弥散作用完成染色的，因此和组织万分结合是不牢固的。它对细胞质着色。
实验材料	肿瘤细胞
试剂、试剂盒	福尔马林 BSS 蒸馏水苏木精液伊红染液丙酮二甲苯
仪器、耗材	光学显微镜树胶载玻片盖玻片洗瓶离心机离心管
实验步骤	一、具体操作 1. 准备组织切片。 2. 37℃温BSS漂洗3次，每次2-3 min。 3. 中性福尔马林固定30 min。 4. 蒸馏水漂洗1次。 5. 用蒸馏水稀释的苏木精液（1/20）染10 min。 6. 自来水洗。 7. 置人1%NaHCO₃液中漂洗至蓝紫色。 8. 伊红染液染30 s-1 min。 9. 蒸馏水洗。 10. 迅速通过丙酮2次，每次3-5 min。 11. 通过2:1丙酮-二甲苯3次，每次1-2 min。 12. 纯二甲苯5-10 min。 13. 树胶封片，即可镜检。二、结果评价细胞核染蓝紫色，细胞质桃红色。组织细胞排列紧密，凋亡细胞与正常细胞分离，胞核皱缩，但因与组织分离，凋亡细胞略显大。展开
注意事项	1. 整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞。 2. 操作时注意避光，反应完毕后尽快在一小时内检测。
其他	肿瘤细胞一般体积大，是正常细胞的3倍以上，核大，核畸形怪状，染色深,和分裂相多见，而且多见病理性核分裂相.肿瘤细胞排列松散，容易脱落。肿瘤细胞核浆比例失调，细胞浆染色改变，或者出现空泡，癌细胞背景则是多有坏死。光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信息的光学仪器。通过光学显微镜检测肿瘤细胞形态有两种方法：HE 染色法和瑞氏和杰姆萨混染法。