气相 液相 离子色谱 气质 液质 SPE 红外 紫外 拉曼 近红外 ASS OES AFS ICP-MS 微波 电镜 天平 纯水设备 测序仪 移液工作站 COD 粒度仪
关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×
头像

分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的测定实验

2019.4.10
实验方法原理植物材料经Tris－HCl缓冲液研磨、离心后，可溶性蛋白质溶于上清液中，非可溶性蛋白则存在于沉淀部分。将沉淀用碱水解，则会得到非可溶性蛋白的提取液。蛋白质提取液与考马斯亮蓝G－250反应呈蓝色。在一定范围内，蛋白质的含量与反应液在595nm波长的吸光度呈正比，由此可求出蛋白质的含量。
实验材料

植物叶片

试剂、试剂盒

考马斯亮蓝溶液HClMgCl2EDTA二硫苏糖醇牛血清蛋白标准母液

仪器、耗材

高速冷冻离心机分光光度计恒温水浴研钵试管移液管洗耳球

实验步骤

1. 牛血清蛋白标准曲线的制作

（1）取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg的牛血清蛋白标准液。

加入表中试剂后，摇匀，以0号管为空白对照，在595nm波长处测定其吸光度（A）值。


（2）标准曲线绘制

以牛血清蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 蛋白质的提取

称取叶片0.3～0.5g，剪碎于冷冻过的研钵中加提取液3 ml，加少量石英砂，在冰浴中快速研磨成匀浆，匀浆倒入离心管中，再用5 ml提取液（分两次）将研钵中匀浆洗入离心管，然后在10000 r/ min，4℃条件下离心20min，上清液即为可溶性蛋白质提取液。

将离心所得的沉淀加3 ml 1mol·L－1NaOH溶液，在90℃恒温水浴中加热20min后，在4000 r / min，4℃条件下离心10min，上清液即为非可溶性蛋白质提取液。

3. 测定

上述两种上清液各取0.1 ml分别放入2支试管中，每管再加Tris缓冲液0.9 ml，空白对照管加Tris缓冲液1 ml，然后各管分别再加入考马斯亮蓝染色液5 ml，摇匀，在595nm波长处测定吸光度（A）值。

五、结果计算

根据所测得的样品液吸光度值，从标准曲线查出蛋白质含量，按下公式计算可溶性蛋白质和非可溶性蛋白质含量。


展


互联网
推荐
推荐作者
仪器推荐
热点排行
一周推荐
关闭

Copyright ©2007-2021 ANTPEDIA, All Rights Reserved

京ICP备07018254号 京公网安备1101085018 电信与信息服务业务经营许可证：京ICP证110310号