3. 细胞样本

细胞作为常用的实验材料，在生物及临床研究中被广泛应用，尤其是对于癌症的研究具有重要意义。细胞培养技术可以把来自机体的组织经分散成为单个细胞，放在类似于体内的体外环境中生长、繁殖或传代，从而用于观察细胞的各种生命现象。细胞可以用于细胞工程与细胞癌变等重要问题的研究。癌细胞体外培养是研究癌变机理和癌细胞行为的主要方法，为肿瘤病因学、遗传学、分子生物学和药理学等研究提供便利的条件。细胞的癌化可能与原癌基因的活化或者抑癌基因的功能受阻有关。MiRNA作为重要的基因表达调控因子，可以起到类似抑癌基因或者原癌基因的作用，也因此通过肿瘤细胞样本，可以对肿瘤发生、发展或转移过程中的miRNA表达进行研究，使用Agilent miRNA芯片可以研究肿瘤细胞或其他细胞系中miRNA的表达谱，对肿瘤或其他细胞中miRNA相关功能研究提供了理想工具。

伯豪客户利用Agilent miRNA芯片技术，检测了多种肿瘤细胞的miRNA表达谱，通过与正常细胞的比较，发现miRNA可以参与多种肿瘤细胞的调控，为研究肿瘤产生的分子机制和药物治疗提供了重要信息。

伯豪案例选摘：

乳腺癌细胞系：

Cai J, Guan H, Fang L, Yang Y, Zhu X, Yuan J, Wu J, Li M. MicroRNA-374a activates Wnt/β-catenin signaling to promote breast cancer metastasis. J Clin Invest. 2013 Feb; 123(2):566-79.

神经胶质瘤细胞系：

Jiang L, Lin C, Song L, Wu J, Chen B, Ying Z, Fang L, Yan X, He M, Li J, Li M. MicroRNA-30e* promotes human glioma cell invasiveness in an orthotopic xenotransplantation model by disrupting the NF-κB/IκBα negative feedback loop. J Clin Invest. 2012, 122(1):33-47.

肝癌细胞系：

Zhu K, Pan Q, Zhang X, Kong LQ, Fan J, Dai Z, Wang L, Yang XR, Hu J, Wan JL, Zhao YM, Tao ZH, Chai ZT, Zeng HY, Tang ZY, Sun HC, Zhou J. MiR-146a enhances angiogenic activity of endothelial cells in hepatocellular carcinoma by promoting PDGFRA expression. Carcinogenesis. 2013, 34(9):2071-9.

4.细胞微粒Microparticles

细胞微粒(microparticles, MPs),也称微囊泡,是各类细胞遭受一系列应激(激活或凋亡)时,从细胞浆膜上脱落而释放的一些膜性小囊泡.研究证实,红细胞、白细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、肿瘤细胞等均可释放细胞微粒,并以其细胞表面标记来分类这些微粒.它是一种球形结构的、直径在0.1～1μm的异源群体,携带有其亲代细胞的特异性抗原的磷脂囊泡,通过出芽方式释放.健康人外周血中也存在一定微粒,其中血小板来源的微粒占总体的70%～90%。研究正常健康人群和肿瘤患者的细胞微粒的miRNA表达谱，也可以找到细胞微粒中特有的miRNA特征物，从而研究肿瘤的类型及相关发生机制。

伯豪案例选摘：

Li D, Jia H, Zhang H, Lv M, Liu J, Zhang Y, Huang T, Huang B.

TLR4 signaling induces the release of microparticles by tumor cells that regulate inflammatory cytokine IL-6 of macrophages via microRNA let-7b.Oncoimmunology. 2012, 1(5):687-693.

5.血浆/血清样本

人体除了一般的细胞组织会表达miRNA之外，研究还表明在血清血浆内，miRNA一般不会被内源性RNase 降解，且在恶劣的条件下（如高温，较低或较高的pH环境，以及多次冻融）仍能以一种非常稳定的形式存在。而且，正常人和不同疾病患者血清/血浆中miRNA的表达谱，也会随着生理状况、疾病种类及病程的不同而发生特异性变化。血清血浆中miRNA含量普遍较低，且个体间差异较大，Agilent miRNA芯片可以使用较低的起始总RNA（miRNA）进行试验，并得较为稳定的检出率。现在，Agilent miRNA芯片已经被较多地应用于疾病miRNA生物标志物的筛选。伯豪客户也发表了一系列较高质量的相关文章，发现了很多有重要意义的无创血清血浆miRNA标志物。

伯豪案例选摘：

● 血浆样本：

复旦大学附属中山医院、复旦大学肝癌研究所樊嘉教授领衔的课题组在肝癌早期诊断方面的研究取得突破。他们从不同人群血浆中筛选到了由7个miRNA组成的早期肝癌诊断分子标记物，将其整合后建立起诊断模型，可用来成功“区分”健康人、慢性乙肝患者、乙肝肝硬化患者和肝癌患者；对小于2厘米的肝癌，检出率更接近九成。

许多研究表明，在肝癌和癌旁正常组织之间存在miRNA表达谱的差异。另外，研究发现在人类血清血浆中存在大量稳定的miRNA。这些现象表明，大家可以寻找肝癌患者血清血浆中高含量的miRNA，以此作为生物标志物进行肝癌的早期诊断。在本研究课题中，研究人员利用miRNA芯片筛选、RT-PCR验证等方法寻找到7个miRNA的组合，这一组合能对乙型肝癌（hepatitis B virus related HCC）患者进行早期诊断。相关成果发表在2011年12月的《Journal of Clinical Oncology》上。miRNA生物芯片技术服务由上海伯豪生物技术有限公司/生物芯片上海国家工程研究中心完成。

伯豪案例：

Zhou J, Yu L, Gao X, Hu J, Wang JP, Dai Z, Wang JF, Zhang ZY, Lu SH, Huang XW, Wang Z, Qiu SJ, Wang XY, Yang GH, Sun HC, Tang ZY, Wu Y, Zhu HG, Fan J. Plasma MicroRNA Panel to Diagnose Hepatitis B Virus–Related Hepatocellular Carcinoma. J Clin Oncol. 2011.38.2697.