系统化的方法开发和验证（一）

工作流程

开发色谱分析方法通常需要耗费很多时间，而且难度很大。传统方法通常是选择一个优选或经常使用的溶剂、pH值、缓冲液和色谱柱组合作为开始点，然后对流动相组成进行 调节，直到摸索出满意的方法。但此过程非常费力，而且经常得不到满意的方法。更系统性的方法是利用良好的实验设计和根据本大纲中描述的工作流程，高效快速开发高质量的反相色谱分析法。本方法开发工作流程包括测试方法摸索，其对如pH值、有机改性剂和色谱柱化学性质等选择性因素进行评估，测定那些能够通过控制选择性从而实现所需分辨率的最有效的试验参数，然后对摸索试验得到的最优分离方案进行优化或微调以得到最终分析方法，然后对分析方法进行验证以确保满足预期方法目标。



开始点

为了设计一个有效的测试方法摸索试验，尽可能多地搜集关于样品和被分析物化学特性的信息是很重要的。

方法开发所需信息
· 样品溶解性能
· 化学结构
· 被分析物数量
需要分离多少分析对象色谱峰？
· 功能基团：被分析物有何区别？
有无可电离基团？电离常数？
pH值如何影响色谱分析？

·检测
需要或可能采用何种检测？
被分析物是否有紫外吸收？
max?

· 浓度范围和定量要求？
需要多高检测水平？
需要多大定量限？
· 样品基质影响
是否有阻碍分离或检测的基质影响？

方法使用目的

在开发一种测试方法之前，还需要考虑，是否理解和明确了测试方法的目标和使用目的，清楚理解使用目的将有助于确定必须要满足的性能参数以及验证方法所需关键参数，例如可能需要从样品的所有组分中分离一种对象被测物的方法，或者可能需要既能从其它组分中分离对象被测物、也能使所有组分之间能够相互分离的方法，其它考虑因素可能还包括：需要多大通量？需要多大分辨率？可以接受的拖尾因子等。我们采用开发从相关化合物中分离帕罗西汀的方法来展示系统方法。