【ABSTRACT】  Objective:To study the relationship among HBVDNA、PreS1 and HbeAg in Patients with Hepatitis,and evaluate the clinical significance of PreS1.Methods:Serum with positive level of HBVDNA(>500 copies/mL) in 179 patients were selected and was detected by realtime fluorescence quantity PCR.Serum PreS1 and HBeAg were detected by ELISA.Results:In 179 patients serum,HBeAg of 119 patients(66.5%)was positive.The detection rate of HBeAg was increased along with the increasing of HBV DNA.PreS1 of 150 patients(83.8%)was positive.Among three groups with different HBV DNA levels,there was no difference between group 1 and group 2,and as well as group 2 and group 3(P>0.05).Only between group 1 and group 3,there was a little difference(χ2=9.38,P<0.05).Conclusion:There was a close relationship between HBVDNA and PreS1.PreS1 has a diagnostic significance to reflect the replication and contagion of HBV.
   
    【KEY WORDS】  Hepatitis virs BDNA；PreS1；HBeAgFQPCR；ELASA

    乙型肝炎病毒(Hepatitis virus B,HBV)是一种DNA病毒,外膜蛋白包括S、前S1、前S2蛋白3种成分。前S1蛋白在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面以及对乙型肝炎患者的诊断、治疗和预后具有重要参考意义[1]。乙肝血清标志物(HBVM)检测是目前诊断乙肝最常用的指标，它主要反映人体对乙肝病毒的免疫反应状态，但不能直接反映HBV在患者体内的复制与传染性情况。血清PCR HBVDNA阳性检出通常作为HBV感染和复制的金标准[2]。为进一步探讨前S1抗原与HBeAg、HBVDNA的关系,我们筛选179例HBVDNA阳性血清并联合PreS1和HBeAg检测，以探讨HBVDNA与PreS1和HBeAg之间的关系并评价PreS1的临床应用价值。

    1  资料与方法

    1.1  一般资料  标本采自北京军区总医院263临床部2006.2～2007.2月179例HBVDNA阳性（>500拷贝/mL）门诊病人血清。

    1.2  方法  血清HBVDNA水平检测采用实时荧光定量PCR法，试剂:上海科华生物工程股份有限公司产品，仪器：上海科华实验系统有限公司FluoCycle实时荧光定量PCR仪。PreS1与HBeAg检测采用ELISA法，试剂分别为上海复星长征医学科学有限公司产品与上海实业科华生物技术有限公司产品。ELISA法使用芬兰Labsystems Dragon Wellscan MK3酶标仪和Wellwash 4 MK 2洗板机。

    1.3  统计学处理  采用χ2检验和Excel 2003数据分析工具。

    2  结果

    2.1  HBVDNA与PreS1的测定结果（见表1）。表1  HBVDNA水平不同患者的PreS1阳性率比较注：*与1组相比P<0.05

    2.2  HBVDNA和HBeAg的测定结果（见表2）。表2  HBVDNA水平不同患者的HBeAg阳性率注：*与1组相比P<0.05

    3  讨论

    HBV DNA含量是判断病毒复制活跃和具有传染性的直接和可靠的依据，血清HBV DNA实时荧光定量PCR法真实的反映了乙型肝炎病毒感染、复制及病程变化。由于采用荧光技术的闭管检测，不仅可以避免常规PCR扩增产物易污染而导致的假阳性，还可以给出HBV DNA体内复制的定量结果[3]，而且灵敏度高、重复好、检测范围宽，可区分HBV感染的不同状态及评估抗病毒治疗效果，但对于一些临床实验室来说，荧光定量PCR法仪器和试剂比较昂贵。HBeAg是HBV基因组前C/C区段的mRNA表达，与HBV DNA关系密切，HBeAg阳性者病毒复制活跃、传染性强，而HBeAg阴性者病毒复制水平低，传染性弱[4]。PreS1蛋白具有吸附于肝细胞受体的表位,在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面具有重要作用[5]。

    在我们对179例乙型肝炎患者HBV DNA阳性血清的检测结果中,HBeAg的总阳性率为66.5%，以HBV DNA水平104拷贝/mL为切割值，HBeAg在HBV DNA小于104拷贝/mL的54例中,阳性率仅为20.4%，与高水平HBV DNA（>104拷贝/mL）两组病例均有较大的差异（P<0.05）。根据表2可看出,随着HBVDNA水平的升高,HBeAg的检出率大幅提高。说明HBeAg阴性或转阴时机体内乙型肝炎病毒并未完全清除，还可能存在低水平复制；或是preC基因或C基因启动子发生了突变，e抗原难以表达而仍存在病毒复制。PreS1总阳性率为83.8%，在三组不同的HBV DNA水平中，1组与2组、2组与3组间无差别（P>0.05），仅1组与3组间存在一定的差异（χ2=9.38，P<0.05），表明PreS1与HBV DNA密切相关，因此作为一项检测HBV的传染性标志的前S1抗原有着重要的临床价值，在没有条件开展PCR定量测定HBV DNA水平的临床实验室，前S1抗原联合两对半的同时检测,对判断乙型肝炎的活动性及指导治疗具有更重要意义。
 
【参考文献】

1 许亚辉.前S1蛋白与乙肝病毒复制的关系\[J\].中国误诊学杂志,2004,4(6):857

2 程钢,何蕴韶.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎毒\[J\].中华医学检验杂,1999,22(3):135

3 Livak KJ,Floos SJA,Marmaro J,et al.Oligonucletides with fluorescent dyes at opposite ends provide a quenched probe system useful for detecting PCR product and nucleic acid hybridization\[J\].PCR Methods Applic,1995,4(3):357

4 姜燕,姜宏,黄园园.乙肝病毒感染者血清HBEAG模式与HBV DNA定量关系的研究\[J\].临床肝胆病杂志,2005,21(5):281

5 柳丽娟,温珠妹,李勤光,等.乙型肝炎病毒前S1抗原与HBVDNA、HBVM的关系及临床意义\[J\].中国医学检验杂志,2002,3(5)∶339340