T淋巴细胞转化试验的注意事项

　　检测方法可分为3H-TdR掺入法、形态学法和MTT法等。

　　1、3H-TdR掺入法 T淋巴细胞受PHA或特异性抗原刺激后，发生有丝分裂，细胞进入S期，且伴随新的DNA合成，若此时加入氚标记的胸腺嘧啶核苷3H-TdR，则3H-TdR可被淋巴细胞作为合成DNA的原料摄入，根据3H-TdR的摄入量，可判断细胞的增殖程度。培养细胞用液体闪烁仪测量，记录每分钟脉冲数（cpm），通过计算，得出刺激数（SI），以此表示转化能力。计算公式为SI （刺激指数）=PHA刺激管cpm均值/对照管cpm均值。

　　2、形态学法 T淋巴细胞与有丝分裂原（PHA）或特异性抗原置37℃孵育72h，淋巴细胞会发生一系列形态变化，如细胞体积增大、胞浆深染、胞核增大、染色质疏松、核仁明显等，此即为淋巴母细胞，然后通过显微镜计数，测出淋巴母细胞的百分率。

　　3、MTT法 MTT为淡黄色偶氮唑盐，活细胞特别是增殖细胞的线粒体脱氢酶活性增高，通过线粒体能量代谢过程，可将MTT代谢形成蓝紫色的甲臜沉积于细胞内或细胞周围，而且甲臜形成量与细胞增殖程度呈正相关，因此通过比色分析就能判断出淋巴细胞的增殖程度。计算公式为：SI（刺激指数）=PHA刺激组吸光度（A）均值/对照管组吸光度（A）均值。