蔗糖酶的提取方法介绍
酵母提纯
酵母离心(8 000 r/min)15 min后收集菌体。将收集到的菌体用蒸馏水洗涤，离心，再洗涤，重复数次，直到菌体呈白色，倾出上清液，将不含杂质的干净的酵母保存待用。
粗酶液的制备
准确称取离心分离后的酵母10 g，加入60 mL 0．5 mmol/L的SDS溶液溶解，在pH值为5．5、50℃水浴中加热12 h后取出，4℃、10 000 r/min离心20 min．上清液即为粗制酶液。4℃保存。
葡萄糖标准曲线的制定
以葡萄糖含量为横坐标。以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
蛋白质标准曲线的制定
以蛋白质含量为横坐标。以吸光度为纵坐标。绘制标准曲线．
蔗糖酶活性的测定
稀释酶液0．5 mL．加入0．3 mL pH值为4．6、0．1 mol/L的NaAc—HAc缓冲液．0．2 mL 0．1 mol/L的蔗糖溶液．37℃准确反应15rain后．加0．125 mL l mol/L的NaOH溶液中止反应。用DNS法在540 nm波长下测定形成的还原糖量。在该条件下。蔗糖酶液1 min转化底物蔗糖生成1g葡萄糖定义为1个活力单位。
粗酶的乙醇初步分离
在所提粗制酶液中加入乙醇使其质量分数达30%，4℃放置过夜，4℃、10 000 r/min离心15 min．取上清液．追加乙醇使其质量分数达50%，4℃放置1 h，4℃、11 000 r/min离心15 min．弃上清液．沉淀用双蒸水溶解．4℃保存。经SDS抽提法提取．质量分数50%的乙醇沉淀所得的酶液用透析法(pH值为7.0的0.05 mol/L%s—HCI缓冲液)充分透析。所得透析液4℃保存。
SDS抽提法提取啤酒酵母中蔗糖酶
工艺条件优化：在单因素试验的基础上。选取SDS摩尔浓度、pH值、提取温度、提取时间4个条件，考察其对酵母蔗糖酶抽提效果的影响．采用4因素3水平正交表L934。做正交试验。
蔗糖酶的纯化
采用O一琼脂糖凝胶FF阴离子交换柱层析纯化粗酶液。将SDS抽提法提取出的蔗糖酶活性高的粗制酶液经质量分数50%的乙醇沉淀，溶解透析后，过Q-琼脂糖凝胶FF阴离子交换柱(用pH值为7．0、0．05 mol/L Tris-HCl缓冲液充分平衡)。用0～1 mol/L、60 min线性梯度的NaCI溶液(内含pH值为7．0、0．05 mol/L%s-HCI缓冲液)洗脱。体积流量为0．5 mL/min，每管收集mL。测定各管洗脱液的蔗糖酶活性与蛋白质含量，合并蔗糖酶活力高的若干管流出液。流出液经过透析脱盐,真空干燥后即为纯化的酵母蔗糖酶。
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焦点事件
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综述
